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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】50Kb以上的DNA提取方法
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catherineguo

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】50Kb以上的DNA提取方法 已有7人参与

请教：用什么方法可以提取大于50Kb的DNA呢？急！
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1楼 2010-05-04 22:03:43
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zxl493

铁虫 (小有名气)
★ ★
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plantaqp(金币+1):欢迎交流 2010-05-05 03:38:24
破碎细胞    再梯度离心
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2楼2010-05-05 00:10:10
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zhwenxing

木虫 (著名写手)

尛森蟲
★ ★
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plantaqp(金币+1):欢迎交流 2010-05-05 03:38:31
不好操作。
1、吸附膜一般是30K以下。
2、手工法能够做到，传统方法，操作注意轻柔。
3、梯度离心可以一定程度上分离部分大的片段。
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3楼2010-05-05 01:50:37
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stliimoon

金虫 (小有名气)
★ ★
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scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-05-05 15:26:45
直接用传统的基因提取方法比较好吧，虽然没kit方便，只要你操作的好，肯定能提的出来的，这么大kit不一定提的出来
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4楼2010-05-05 08:37:52
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catherineguo

铁虫 (初入文坛)
非常感谢各位回复！我提的是植物DNA，之前也用传统方法提了几次，枪头也剪了，离心时多数步骤只有5000rpm，但片段也就是刚大于23kb，看起来没有达到50kb。我再做做看，大家若有更好的方法，请告诉我一下。谢谢了！

另外，有没有人用过Fermentas的GeneRuler High Range DNA Ladder,ready to use.货号是SM1353？它的片段范围是10-48kb。用什么样的电泳条件及胶浓度才能跑出理想的条带呢？
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5楼2010-05-05 09:46:00
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wnavy200299

金虫 (小有名气)

50kbDNA提取

★
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怎么这么大呢？赶上人工染色体了！换个思路想想！一般的DNA提取估计很难！
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6楼2010-05-05 10:21:52
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liyong1981

金虫 (正式写手)
★
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是有点大了，呵呵，加油
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7楼2010-05-05 13:04:54
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快乐由自己go

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
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lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-05-31 19:02:47
建议用凝胶包埋的方法提。可以查阅文库构建的DNA提取方法
如果技术够可以的话，普通方法温柔小心些也会得到50k，但难度很大。
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8楼2010-05-05 16:13:47
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catherineguo

铁虫 (初入文坛)
谢谢各位的回复！凝胶包埋法确实可以满足我的要求，就是程序有些复杂，努力中。
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9楼2010-05-31 17:40:10
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快乐由自己go

银虫 (小有名气)
★
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引用回帖:
Originally posted by catherineguo at 2010-05-31 17:40:10:
谢谢各位的回复！凝胶包埋法确实可以满足我的要求，就是程序有些复杂，努力中。

大胆动手，小心操作，慢慢摸索，没问题的。
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10楼2010-05-31 20:16:19
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