应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】麻烦大家帮忙看看非变性聚丙烯酰胺电泳图片
51/1返回列表
查看: 2563  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

风中摇曳

木虫 (正式写手)

热爱科学

[交流] 【求助/交流】麻烦大家帮忙看看非变性聚丙烯酰胺电泳图片 已有7人参与

本虫最近在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，采用单链构象多态性分析技术，以寻找SNP。银染结果不佳，目的条带极不清晰，无法辨别结果。恳请大家指点：
      1.PCR扩增片段为300bp，使用29：1聚丙烯酰胺原液，聚丙烯酰胺浓度为8%。使用电压300v15min，130v电压恒压13小时，1倍TBE缓冲液。
     2.上样缓冲液为去离子甲酰胺：溴酚蓝和二甲苯青=4：1，98°变性10min,冰浴5min。
     3 .染色：双蒸水漂洗两次；0.1%AgNO3，轻摇15min，弃去反应液，双蒸水漂洗两次；2%NaOH及2ml甲醛显色。
     中间的点样孔为marker,不清楚底部的亮带为何种片段？位置偏上的条带为何模糊不清？最近的电泳结果真的十分苦恼。
不知道是否有研究SSCP的讨论群及园友 ，恳请批评指点。谢谢大家的帮助！


[ Last edited by 风中摇曳 on 2010-4-24 at 13:15 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
scienceisnature
1楼 2010-04-16 21:57:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

另一个天堂

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 神仙精灵W at 2011-09-23 15:31:04:
为什么你们的背景色这么黄 我的背景色黑黑的？？我哪里错了

很可能是显色时间过长，有图最好
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-09-23 16:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
变性胶我们一般使用19：1的，浓度也就是4.5%-6%，你这个浓度好高
另外跑变性胶，你这个电压肯定有问题，一般都是上千伏，变性胶也很少有使用氢氧化钠法显色的，一般都是碳酸钠法

你给的这个好像是非变性的做法，使用29：1的胶，浓度使用8%的胶，电压看电泳槽长度，30cm的一般300V，用氢氧化钠显色效果就不错
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-04-16 22:50:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风中摇曳

木虫 (正式写手)

热爱科学
我用的是非变性的聚丙烯酰胺凝胶。现在银染技术仍需继续摸索。不知大家在非变性的聚丙烯酰胺凝胶是否用DNAmarker
赞一下 回复此楼
scienceisnature
3楼2010-04-17 10:57:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wodepower

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主可以去看下具体的银染操作，有篇文献叫Silver staining DNA in polyacrylamide gels专门讲银染的。操作过程很详细。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-03-25 20:33:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 材料与化工求调剂 +3 为学666 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:09 by 加号+
[考研] 312求调剂 +3 陌宸希 2026-03-16 4/200 2026-03-16 15:06 by peike
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +6 zlingli 2026-03-13 6/300 2026-03-15 20:00 by ryzcf
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 0856材料与化工309分求调剂 +6 ZyZy…… 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:38 by JourneyLucky
[考研] 2026考研调剂+本科延边大学+山东大学+生物化学与分子生物学+有项目经验 +3 ccdsscjy 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:12 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[考研] 0703化学求调剂 +7 绿豆芹菜汤 2026-03-12 7/350 2026-03-13 17:25 by njzyff
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 321求调剂（食品/专硕） +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
[考研] 哈工大材料324求调剂 +6 闫旭东 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:49 by 星空星月
[考研] 化工0817调剂 +8 灿若星晨 2026-03-10 8/400 2026-03-10 22:44 by 星空星月
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭