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风中摇曳木虫 (正式写手)
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【求助/交流】麻烦大家帮忙看看非变性聚丙烯酰胺电泳图片 已有7人参与
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本虫最近在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，采用单链构象多态性分析技术，以寻找SNP。银染结果不佳，目的条带极不清晰，无法辨别结果。恳请大家指点： 1.PCR扩增片段为300bp，使用29：1聚丙烯酰胺原液，聚丙烯酰胺浓度为8%。使用电压300v15min，130v电压恒压13小时，1倍TBE缓冲液。 2.上样缓冲液为去离子甲酰胺：溴酚蓝和二甲苯青=4：1，98°变性10min,冰浴5min。 3 .染色：双蒸水漂洗两次；0.1%AgNO3，轻摇15min，弃去反应液，双蒸水漂洗两次；2%NaOH及2ml甲醛显色。 中间的点样孔为marker,不清楚底部的亮带为何种片段？位置偏上的条带为何模糊不清？最近的电泳结果真的十分苦恼。 不知道是否有研究SSCP的讨论群及园友 ，恳请批评指点。谢谢大家的帮助！  [ Last edited by 风中摇曳 on 2010-4-24 at 13:15 ] |
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