应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】麻烦大家帮忙看看非变性聚丙烯酰胺电泳图片
51/1返回列表
查看: 2562  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

风中摇曳

木虫 (正式写手)

热爱科学

[交流] 【求助/交流】麻烦大家帮忙看看非变性聚丙烯酰胺电泳图片 已有7人参与

本虫最近在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，采用单链构象多态性分析技术，以寻找SNP。银染结果不佳，目的条带极不清晰，无法辨别结果。恳请大家指点：
      1.PCR扩增片段为300bp，使用29：1聚丙烯酰胺原液，聚丙烯酰胺浓度为8%。使用电压300v15min，130v电压恒压13小时，1倍TBE缓冲液。
     2.上样缓冲液为去离子甲酰胺：溴酚蓝和二甲苯青=4：1，98°变性10min,冰浴5min。
     3 .染色：双蒸水漂洗两次；0.1%AgNO3，轻摇15min，弃去反应液，双蒸水漂洗两次；2%NaOH及2ml甲醛显色。
     中间的点样孔为marker,不清楚底部的亮带为何种片段？位置偏上的条带为何模糊不清？最近的电泳结果真的十分苦恼。
不知道是否有研究SSCP的讨论群及园友 ，恳请批评指点。谢谢大家的帮助！


[ Last edited by 风中摇曳 on 2010-4-24 at 13:15 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
scienceisnature
1楼 2010-04-16 21:57:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风中摇曳

木虫 (正式写手)

热爱科学
我用的是非变性的聚丙烯酰胺凝胶。现在银染技术仍需继续摸索。不知大家在非变性的聚丙烯酰胺凝胶是否用DNAmarker
赞一下 回复此楼
scienceisnature
3楼2010-04-17 10:57:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
变性胶我们一般使用19：1的，浓度也就是4.5%-6%，你这个浓度好高
另外跑变性胶，你这个电压肯定有问题，一般都是上千伏，变性胶也很少有使用氢氧化钠法显色的，一般都是碳酸钠法

你给的这个好像是非变性的做法，使用29：1的胶，浓度使用8%的胶，电压看电泳槽长度，30cm的一般300V，用氢氧化钠显色效果就不错
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-04-16 22:50:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wodepower

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
楼主可以去看下具体的银染操作，有篇文献叫Silver staining DNA in polyacrylamide gels专门讲银染的。操作过程很详细。
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-03-25 20:33:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wening

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1、你的上样量是多少？上样量过多会出现跑不好。
2、电压确定是130V吗？我们跑的是80W或120W  电压达到几千伏
3、如果是小板胶，银染过程中应该不存在冲洗时间长短对显带造成大的影响
4、聚丙烯酰胺分辨率较高，有多条带是常有的事，但从你的MARKER看出，不是样品出问题。而是电泳问题
  建议你减少上样量更试试，显色时间不宜太长。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-03-26 16:01:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 化学工程321分求调剂 +9 大米饭！ 2026-03-15 12/600 2026-03-16 21:59 by 大米饭！
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +8 一鸭鸭哟 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:35 by 沐霖12138
[考研] 环境工程调剂 +6 大可digkids 2026-03-16 6/300 2026-03-16 17:16 by barlinike
[考研] 070300化学学硕求调剂 +6 太想进步了0608 2026-03-16 6/300 2026-03-16 16:13 by kykm678
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 材料与化工求调剂 +3 为学666 2026-03-16 3/150 2026-03-16 15:09 by 加号+
[考研] 312求调剂 +3 陌宸希 2026-03-16 4/200 2026-03-16 15:06 by peike
[考研] 326求调剂 +4 上岸的小葡 2026-03-15 5/250 2026-03-16 08:39 by Linda Hu
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 289求调剂 +5 步川酷紫123 2026-03-11 5/250 2026-03-15 00:45 by kruisytel
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 一志愿华中农业大学071010，总分三百二,求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:35 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 球球古力 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:27 by JourneyLucky
[考研] 301求调剂 +6 Liyouyumairs 2026-03-11 6/300 2026-03-13 20:11 by JourneyLucky
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 328化工专硕求调剂 +4 。，。，。，。i 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:44 by JourneyLucky
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭