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1121prettycat木虫 (正式写手)
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[交流]
【求助/交流】关于MTT法吸光度值偏小 已有4人参与
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目前正在用MTT法测定细胞存活率，步骤是将培养液吸出后，加入200微升MTT，37°孵育3到4个小时，然后加入150微升DMSO，想问一下大家用的检测波长和参考波长都是多少，我目前用的是490nm的检测波长和650nm的测定波长，现在用490nm得到的吸光度值包括对照都不到0.2，大约在0.17左右，650nm检测得到的数据大约都在0.05或者0.06，不知道吸光度值偏小是因为孵育时间不够还是与细胞有关，因为使用别的细胞的时候吸光度值都没有这么小，想问一下吸光度这么小数据能否使用？ 还有数据处理的时候是不是应该用各孔在490nm检测时得到的数值-650nm检测时得到的数值？ |
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这个怎么说呢，就像核酸测浓度时用260nm，蛋白测浓度用280nm一样，是因为不同的东西有其相对应的吸光值。MTT染色测定需要用490nm，这应该也是理论中的事。 另外，5mg/L的MTT，每孔200微升，是不是有点少了，你应该接种的是96孔板，7.5万个细胞的接种量还可以，但是5mg/ml的浓度，是你配的5mg/L的1000倍，前者加20ul的话，你的应该加20ml才对，也就是说你的量不够。可以再做一次试试。 还有MTT有效期是一周，需要避光保存的。所以要注意。不过我用过避光放置一个月的（-20°C），也可以用，呵呵 祝好运 |
7楼2010-01-10 11:05:44
kellysun
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