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1121prettycat

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于MTT法吸光度值偏小已有4人参与

目前正在用MTT法测定细胞存活率,步骤是将培养液吸出后,加入200微升MTT,37°孵育3到4个小时,然后加入150微升DMSO,想问一下大家用的检测波长和参考波长都是多少,我目前用的是490nm的检测波长和650nm的测定波长,现在用490nm得到的吸光度值包括对照都不到0.2,大约在0.17左右,650nm检测得到的数据大约都在0.05或者0.06,不知道吸光度值偏小是因为孵育时间不够还是与细胞有关,因为使用别的细胞的时候吸光度值都没有这么小,想问一下吸光度这么小数据能否使用?
还有数据处理的时候是不是应该用各孔在490nm检测时得到的数值-650nm检测时得到的数值?
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1121prettycat

木虫 (正式写手)

加的5mg/L的MTT,每孔200微升,用的是原代培养的大鼠小脑颗粒神经元,接种密度7.5万,在培养1d后加药,加药1d和7d后测定
4楼2010-01-08 14:19:05
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1121prettycat

木虫 (正式写手)

用470nm和489nm的依据到底是什么呢
6楼2010-01-08 17:20:44
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1121prettycat

木虫 (正式写手)

我觉得和使用的细胞有关系吧,最后改成AB法检测
20楼2014-08-13 21:15:55
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