版块导航: 正在加载中...

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (4576)
>虫友互识 (594)
>导师招生 (500)
>文献求助 (312)
>找工作 (289)
>论文投稿 (257)
>职场人生 (245)
>休闲灌水 (167)
>考博 (153)
>考研 (107)
>硕博家园 (100)
>博后之家 (88)
>学术会议 (85)
>招聘信息布告栏 (69)
>医学 (64)
>有机交流 (32)

返回列表

Melodyzhang

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 628.5
散金: 239
红花: 22
帖子: 499
在线: 152.2小时
虫号: 1352812
注册: 2011-07-22
性别: MM
专业: 生物材料

[求助] MTT法请教

我做的MTT空白孔为什么比有细胞的孔OD值要高很多啊？做空白对照的96孔板是新打开的，加了100微升1640和20微升MTT，37度4小时之后再加150微升DMSO，有细胞的孔处理方法一样，可是测出来的值反而空白孔OD高，到底是哪里除了问题啊？我是做MTT法的新手，哪位大侠能不能帮帮我啊？谢谢

回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

科研资源

» 猜你喜欢

关于核磁制样已经有3人回复
郑州大学申博已经有6人回复

waiting

1楼 2011-08-12 02:25:17

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

nicknelson

至尊木虫 (职业作家)

应助: 7 (幼儿园)
金币: 34571.9
散金: 16
红花: 1
帖子: 3853
在线: 589.7小时
虫号: 319500
注册: 2007-03-08
性别: GG
专业: 生物物理、生物化学与分子

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-08-15 10:26:47

MTS是MTT的升级版，promega公司的产品。你上公司网页上找就行。我用MTS也出现过调零孔比细胞孔数值还要高的情况，不知道为什么，不过很少见。有人在加MTS时，先把培养基和MTS混合好，再把每个孔换液加进去，好像能避免这种情况，不过这种情况很少见。

赞一下(2人)

回复此楼

13楼2011-08-15 00:16:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

马龙sweeting

木虫 (正式写手)

应助: 5 (幼儿园)
金币: 2102.1
散金: 36
红花: 5
帖子: 506
在线: 55.5小时
虫号: 1319416
注册: 2011-06-10
专业: 细胞信号转导

★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-08-16 19:22:17

我是这么做的：每孔加20微升MTT，4小时后，把MTT连培养液一起吸出，要吸干净，然后加150微升DMSO，摇床10min，酶标仪检测。
调零孔比试验孔高可能是因为你的培养液里染了细胞，可能是因为操作不规范等等把细胞带入培养液了，你可以取少量培养液在显微镜下观察一下看看有没有细胞~~

赞一下(2人)

回复此楼

16楼2011-08-16 16:38:36

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

Melodyzhang

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 628.5
散金: 239
红花: 22
帖子: 499
在线: 152.2小时
虫号: 1352812
注册: 2011-07-22
性别: MM
专业: 生物材料

引用回帖:

33楼: Originally posted by 倪言 at 2013-08-30 14:01:01
我一般把MTT之间加到1640培养基里面的培养基为100μl，MTT加4μl ，培养4小时后，把培养基（含MTT）用吸掉，然后加DMSO（200μl）之后震荡，然后595nm测od，行不？...

我觉得还不是吸掉MTT好，因为吸的的时候残留物的多少你也不好掌控，培养完之后直接加DMSO测，这样比较好

赞一下(1人)

回复此楼

waiting

34楼2013-08-30 14:12:26

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

普通回帖

浪人利利

金虫 (正式写手)

BioEPI: 2
应助: 1 (幼儿园)
金币: 1210.8
散金: 1128
红花: 2
帖子: 602
在线: 307.6小时
虫号: 445310
注册: 2007-10-28
专业: 代谢性疾病药物药理

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 感谢应助，祝顺利！ 2011-08-12 09:48:12
Melodyzhang(金币+1): 2011-08-12 18:51:26

培养液和MTT不要倒掉，直接加DMSO后轻摇，再测一下试试

赞一下(1人)

回复此楼

2楼2011-08-12 08:45:58

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

Melodyzhang

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 628.5
散金: 239
红花: 22
帖子: 499
在线: 152.2小时
虫号: 1352812
注册: 2011-07-22
性别: MM
专业: 生物材料

谢谢哦~~~~可是我就是都没有倒掉培养液测的啊~~~，我还害怕含血清的1640会影响OD，所以吸掉旧培养液用PBS漂洗一遍之后，吸净PBS，换为不含血清的1640培养4h，可是测出的结果就是前五天有细胞的孔OD值比空白都要低~~~这到底是什么地方出问题了啊？

赞一下

回复此楼

waiting

3楼2011-08-12 15:21:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

wangyu4198

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 41.8
帖子: 31
在线: 16.7小时
虫号: 927644
注册: 2009-12-14
专业: 细胞死亡

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-08-12 19:07:13

我们实验室是这样做的：我们把MTT之间加到1640培养基里面的培养基一般100μl，MTT加10μl ，37度培养四小时后，把培养基（含MTT）用1ml注射器吸掉，然后加DMSO（150μl）之后震荡10min 后直接测了

赞一下(2人)

回复此楼

4楼2011-08-12 18:24:23

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

Melodyzhang

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 628.5
散金: 239
红花: 22
帖子: 499
在线: 152.2小时
虫号: 1352812
注册: 2011-07-22
性别: MM
专业: 生物材料

引用回帖:

4楼: Originally posted by wangyu4198 at 2011-08-12 18:24:23:
我们实验室是这样做的：我们把MTT之间加到1640培养基里面的培养基一般100μl，MTT加10μl ，37度培养四小时后，把培养基（含MTT）用1ml注射器吸掉，然后加DMSO（150μl）之后震荡10min 后直接测了

谢谢

~~~~~我看到论坛里有的虫虫是吸出培养基有的是不吸出，觉得应该都可以吧，不吸出来就是怕吸跑结晶。可是为什么是同样的1640和MTT，空白孔却比有细胞的孔OD值大呢？谢谢大家