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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » MTT法请教
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Melodyzhang

金虫 (正式写手)

[求助] MTT法请教

我做的MTT空白孔为什么比有细胞的孔OD值要高很多啊？做空白对照的96孔板是新打开的，加了100微升1640和20微升MTT，37度4小时之后再加150微升DMSO，有细胞的孔处理方法一样，可是测出来的值反而空白孔OD高，到底是哪里除了问题啊？我是做MTT法的新手，哪位大侠能不能帮帮我啊？谢谢
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waiting
1楼 2011-08-12 02:25:17
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马龙sweeting

木虫 (正式写手)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-08-16 19:22:17
我是这么做的：每孔加20微升MTT，4小时后，把MTT连培养液一起吸出，要吸干净，然后加150微升DMSO，摇床10min，酶标仪检测。  
调零孔比试验孔高可能是因为你的培养液里染了细胞，可能是因为操作不规范等等把细胞带入培养液了，你可以取少量培养液在显微镜下观察一下看看有没有细胞~~
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16楼2011-08-16 16:38:36
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浪人利利

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 感谢应助，祝顺利！ 2011-08-12 09:48:12
Melodyzhang(金币+1): 2011-08-12 18:51:26
培养液和MTT不要倒掉，直接加DMSO后轻摇，再测一下试试
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2楼2011-08-12 08:45:58
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Melodyzhang

金虫 (正式写手)
谢谢哦~~~~可是我就是都没有倒掉培养液测的啊~~~，我还害怕含血清的1640会影响OD，所以吸掉旧培养液用PBS漂洗一遍之后，吸净PBS，换为不含血清的1640培养4h，可是测出的结果就是前五天有细胞的孔OD值比空白都要低~~~这到底是什么地方出问题了啊？
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waiting
3楼2011-08-12 15:21:55
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wangyu4198

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-08-12 19:07:13
我们实验室是这样做的 ：我们把MTT之间加到1640培养基里面的 培养基一般100μl，MTT加10μl ，37度培养四小时后，把培养基（含MTT）用1ml注射器 吸掉 ，然后加DMSO（150μl） 之后震荡10min 后 直接测了
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4楼2011-08-12 18:24:23
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