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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » MTT法请教
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Melodyzhang

金虫 (正式写手)

[求助] MTT法请教

我做的MTT空白孔为什么比有细胞的孔OD值要高很多啊？做空白对照的96孔板是新打开的，加了100微升1640和20微升MTT，37度4小时之后再加150微升DMSO，有细胞的孔处理方法一样，可是测出来的值反而空白孔OD高，到底是哪里除了问题啊？我是做MTT法的新手，哪位大侠能不能帮帮我啊？谢谢
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waiting
1楼2011-08-12 02:25:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-08-15 10:26:47
MTS是MTT的升级版，promega公司的产品。你上公司网页上找就行。我用MTS也出现过调零孔比细胞孔数值还要高的情况，不知道为什么，不过很少见。有人在加MTS时，先把培养基和MTS混合好，再把每个孔换液加进去，好像能避免这种情况，不过这种情况很少见。
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13楼2011-08-15 00:16:14
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马龙sweeting

木虫 (正式写手)
★ ★
lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-08-16 19:22:17
我是这么做的：每孔加20微升MTT，4小时后，把MTT连培养液一起吸出，要吸干净，然后加150微升DMSO，摇床10min，酶标仪检测。  
调零孔比试验孔高可能是因为你的培养液里染了细胞，可能是因为操作不规范等等把细胞带入培养液了，你可以取少量培养液在显微镜下观察一下看看有没有细胞~~
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16楼2011-08-16 16:38:36
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Melodyzhang

金虫 (正式写手)
引用回帖:
33楼: Originally posted by 倪言 at 2013-08-30 14:01:01
我一般把MTT之间加到1640培养基里面的 培养基为100μl，MTT加4μl ，培养4小时后，把培养基（含MTT）用吸掉 ，然后加DMSO（200μl） 之后震荡， 然后595nm测od，行不？...

我觉得还不是吸掉MTT好，因为吸的的时候残留物的多少你也不好掌控，培养完之后直接加DMSO测，这样比较好
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waiting
34楼2013-08-30 14:12:26
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普通回帖

浪人利利

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 感谢应助，祝顺利！ 2011-08-12 09:48:12
Melodyzhang(金币+1): 2011-08-12 18:51:26
培养液和MTT不要倒掉，直接加DMSO后轻摇，再测一下试试
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2楼2011-08-12 08:45:58
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Melodyzhang

金虫 (正式写手)
谢谢哦~~~~可是我就是都没有倒掉培养液测的啊~~~，我还害怕含血清的1640会影响OD，所以吸掉旧培养液用PBS漂洗一遍之后，吸净PBS，换为不含血清的1640培养4h，可是测出的结果就是前五天有细胞的孔OD值比空白都要低~~~这到底是什么地方出问题了啊？
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3楼2011-08-12 15:21:55
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wangyu4198

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-08-12 19:07:13
我们实验室是这样做的 ：我们把MTT之间加到1640培养基里面的 培养基一般100μl，MTT加10μl ，37度培养四小时后，把培养基（含MTT）用1ml注射器 吸掉 ，然后加DMSO（150μl） 之后震荡10min 后 直接测了
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4楼2011-08-12 18:24:23
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Melodyzhang

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wangyu4198 at 2011-08-12 18:24:23:
我们实验室是这样做的 ：我们把MTT之间加到1640培养基里面的 培养基一般100μl，MTT加10μl ，37度培养四小时后，把培养基（含MTT）用1ml注射器 吸掉 ，然后加DMSO（150μl） 之后震荡10min 后 直接测了

谢谢~~~~~我看到论坛里有的虫虫是吸出培养基有的是不吸出，觉得应该都可以吧，不吸出来就是怕吸跑结晶。可是为什么是同样的1640和MTT，空白孔却比有细胞的孔OD值大呢？谢谢大家
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waiting
5楼2011-08-12 19:09:21
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爽爽04

铜虫 (初入文坛)
建议还是将培养基完全吸干再加DMSO摇匀再测哦
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6楼2011-08-13 12:15:08
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
换MTS吧，MTT过时了。
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7楼2011-08-14 21:12:41
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Melodyzhang

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by nicknelson at 2011-08-14 21:12:41:
换MTS吧，MTT过时了。

哦~~~~好像也是哦~~~~
你也遇到过这样的问题吗？
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8楼2011-08-14 21:42:52
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nicknelson

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
adslye(金币+2): 感谢交流~祝顺利！ 2011-08-19 11:27:00
因为MTT操作太麻烦，容易导致误差很大，甚至出现严重错误。你加DMSO时没有把1640吸出来吗？一个空能装270微升那么多吗？
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9楼2011-08-14 21:53:02
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Melodyzhang

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by nicknelson at 2011-08-14 21:53:02:
因为MTT操作太麻烦，容易导致误差很大，甚至出现严重错误。你加DMSO时没有把1640吸出来吗？一个空能装270微升那么多吗？

嗯，没有吸出来，因为晶体太容易被吸走了，一个孔可以装下270微升的~~~~
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waiting
10楼2011-08-14 22:07:22
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