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Melodyzhang

金虫 (正式写手)

[求助] MTT法请教

我做的MTT空白孔为什么比有细胞的孔OD值要高很多啊?做空白对照的96孔板是新打开的,加了100微升1640和20微升MTT,37度4小时之后再加150微升DMSO,有细胞的孔处理方法一样,可是测出来的值反而空白孔OD高,到底是哪里除了问题啊?我是做MTT法的新手,哪位大侠能不能帮帮我啊?谢谢
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waiting
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倪言

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wangyu4198 at 2011-08-12 18:24:23
我们实验室是这样做的 :我们把MTT之间加到1640培养基里面的 培养基一般100μl,MTT加10μl ,37度培养四小时后,把培养基(含MTT)用1ml注射器 吸掉 ,然后加DMSO(150μl) 之后震荡10min 后 直接测了

我一般把MTT之间加到1640培养基里面的 培养基为100μl,MTT加4μl ,培养4小时后,把培养基(含MTT)用吸掉 ,然后加DMSO(200μl) 之后震荡, 然后595nm测od,行不?
爱生活爱自己
33楼2013-08-30 14:01:01
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浪人利利

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
adslye(金币+2): 感谢应助,祝顺利! 2011-08-12 09:48:12
Melodyzhang(金币+1): 2011-08-12 18:51:26
培养液和MTT不要倒掉,直接加DMSO后轻摇,再测一下试试
2楼2011-08-12 08:45:58
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Melodyzhang

金虫 (正式写手)

谢谢哦~~~~可是我就是都没有倒掉培养液测的啊~~~,我还害怕含血清的1640会影响OD,所以吸掉旧培养液用PBS漂洗一遍之后,吸净PBS,换为不含血清的1640培养4h,可是测出的结果就是前五天有细胞的孔OD值比空白都要低~~~这到底是什么地方出问题了啊?
waiting
3楼2011-08-12 15:21:55
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wangyu4198

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-08-12 19:07:13
我们实验室是这样做的 :我们把MTT之间加到1640培养基里面的 培养基一般100μl,MTT加10μl ,37度培养四小时后,把培养基(含MTT)用1ml注射器 吸掉 ,然后加DMSO(150μl) 之后震荡10min 后 直接测了
4楼2011-08-12 18:24:23
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