MTT法请教 - 生物科学 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

11楼2011-08-14 22:10:29

Melodyzhang

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11楼: Originally posted by nicknelson at 2011-08-14 22:10:29:
那我觉得可能有几种原因：1是你加入DMSO后没有震荡，或者由于有培养基所以DMSO浓度小，导致MTT反应产物没有完全溶解，所以测得的数据不准确。2是如果你加入DMSO后，如果震荡的话，那么这么大的体积很容易把液体洒 ...

我是加入DMSO以后用移液枪上下反复推吸的~~~~~
有一个不好意思的问题

~~什么是MTS啊？我怎么百度不出来啊？

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12楼2011-08-14 22:24:51

nicknelson

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lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-08-15 10:26:47

MTS是MTT的升级版，promega公司的产品。你上公司网页上找就行。我用MTS也出现过调零孔比细胞孔数值还要高的情况，不知道为什么，不过很少见。有人在加MTS时，先把培养基和MTS混合好，再把每个孔换液加进去，好像能避免这种情况，不过这种情况很少见。

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13楼2011-08-15 00:16:14

Melodyzhang

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4楼: Originally posted by wangyu4198 at 2011-08-12 18:24:23:
我们实验室是这样做的：我们把MTT之间加到1640培养基里面的培养基一般100μl，MTT加10μl ，37度培养四小时后，把培养基（含MTT）用1ml注射器吸掉，然后加DMSO（150μl）之后震荡10min 后直接测了

可是注射器也会吸走结晶啊？你们是怎么控制的啊？

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14楼2011-08-15 12:26:56

Melodyzhang

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13楼: Originally posted by nicknelson at 2011-08-15 00:16:14:
MTS是MTT的升级版，promega公司的产品。你上公司网页上找就行。我用MTS也出现过调零孔比细胞孔数值还要高的情况，不知道为什么，不过很少见。有人在加MTS时，先把培养基和MTS混合好，再把每个孔换液加进去，好像能 ...

谢谢

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15楼2011-08-15 12:30:05

马龙sweeting

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lstt09nk(金币+2): 感谢参与 2011-08-16 19:22:17

我是这么做的：每孔加20微升MTT，4小时后，把MTT连培养液一起吸出，要吸干净，然后加150微升DMSO，摇床10min，酶标仪检测。
调零孔比试验孔高可能是因为你的培养液里染了细胞，可能是因为操作不规范等等把细胞带入培养液了，你可以取少量培养液在显微镜下观察一下看看有没有细胞~~

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16楼2011-08-16 16:38:36

wangyu4198

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14楼: Originally posted by Melodyzhang at 2011-08-15 12:26:56:

可是注射器也会吸走结晶啊？你们是怎么控制的啊？

我们做的是贴壁细胞用的是带针头的注射器动作轻柔点

17楼2011-08-16 19:13:18

梧桐如雪

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lstt09nk(金币+5): 辛苦 2011-08-17 00:13:21

MTT本身就很不稳定，sigma的还可以。而且实验数据如果不是老手，也不太稳定，重复性差，还不如结晶紫比色呢。我以前还出现过一块板都一种颜色，什么梯度也没有，镜检时很好的。后来直接扣板倒液体（贴壁细胞），烘箱里烘干了再加DMSO，时好时不好，用国药的DMSO不如sigma的好（专门用于细胞的那种）。后来考虑到实验成本，买了同仁的CCK-8代替了MTT。实验数据非常漂亮，很稳定，操作又快又方便。不是做广告，我是真的因为用得好才介绍的，如果有条件可以试一下。虽然这个试剂确实很贵，但是比起重复的做实验，不算浪费了。最重要的是做出来的实验结果经得起反复推敲。

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18楼2011-08-16 21:53:17

Melodyzhang

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16楼: Originally posted by 马龙sweeting at 2011-08-16 16:38:36:
我是这么做的：每孔加20微升MTT，4小时后，把MTT连培养液一起吸出，要吸干净，然后加150微升DMSO，摇床10min，酶标仪检测。
调零孔比试验孔高可能是因为你的培养液里染了细胞，可能是因为操作不规范等等把细胞 ...

可以排除污染问题的，因为我把1640用0.22的膜过了一遍。然后又试了几次，4小时后吸净培养液的和不吸培养液的都试了，空白孔也是吸净与不吸的都试了，可是还是空白孔OD值大~~~~这是为什么啊？
你们有没有试过这样的啊？加MTT前把培养液吸净，然后只加MTT不加培养液，MTT多加一些比如50微升，没过孔底，然后培养4个小时，加入150微升DMSO再测，这样做可行吗？

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19楼2011-08-17 14:50:24

马龙sweeting

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看天(金币+1): 鼓励一下 2011-08-18 23:49:37

我从没有这样做过~~不过我觉得这样MTT浓度太大了~~可能会对你的实验结果有影响~~

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20楼2011-08-17 17:01:50