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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA琼脂糖凝胶回收，为什么回收率太低！
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lfgc8505

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA琼脂糖凝胶回收，为什么回收率太低！ 已有8人参与

小虫，最近遇到一个很奇怪的问题，最近在做DNA琼脂糖凝胶回收时，总是回收不到，每次测得的回收DNA量都只有几纳克，而DNA 凝胶电泳，条带很亮，切胶没问题。而且用了QIANGEN ,TIANGEN, TAKARA的试剂盒，都不行，而之前十月份的时候回收的还可以。
哪位高手知道的，请多多指教！
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1楼 2009-12-11 23:07:13
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
buffer不新鲜了？我指配胶和电泳的buffer
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2楼2009-12-11 23:57:47
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tianpingpe

新虫 (小有名气)
你的琼脂糖有没有问题？电泳buffer有问题没有？如果切的胶太厚，也会降低你的回收效率，你洗脱的时候保证自己加的超纯水在柱子的中间吗？加了以后静置3min，能提高回收率，洗脱后可以将洗脱后的超纯水再加入进去再洗脱一次；
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3楼2009-12-12 10:29:12
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hyde0706

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
胶的量不能太大，最好薄一些，切的时候尽量少切一些周围的胶。洗脱的时候水可以加热，有利于提高回收效率。
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4楼2009-12-12 10:48:50
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gastrodia

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我做琼脂糖回收得到的浓度一般也就是10ng/ul左右，但是做载体构建已经够用了
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5楼2009-12-12 10:50:01
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apple-z

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎多多交流~~ 2010-05-21 20:19:18
我使用的就是天根的试剂盒，回收效率还可以啊。
操作时要注意：胶融化后一定要降到室温才可以加到平衡住内，否则会影响DNA与柱子的结合的，进而就影响了回收效率。
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6楼2009-12-12 14:30:32
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tancf

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我用了博大泰克的产品，感觉还好。
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7楼2009-12-12 14:52:41
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xuezhen

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们用的是生工的UNIQ-10，感觉效果还好，呵呵！学习一下！
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8楼2009-12-12 17:12:17
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goodwish

木虫 (正式写手)

木虫书呆子
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
80%的可能是是最后从柱子上洗脱DNA的超纯水PH太低。建议你配制专用的Elute Buffer——用NaOH把超纯水的PH调到8.0，专门用来做DNA回收。
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生命的海洋里，我是蓝色的一滴
9楼2009-12-12 18:19:06
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lfgc8505

金虫 (小有名气)

buffer是新配的啊？

引用回帖:
Originally posted by lfgc8505 at 2009-12-11 23:07:
小虫，最近遇到一个很奇怪的问题，最近在做DNA琼脂糖凝胶回收时，总是回收不到，每次测得的回收DNA量都只有几纳克，而DNA 凝胶电泳，条带很亮，切胶没问题。而且用了QIANGEN ,TIANGEN, TAKARA的试剂盒，都不行，而 ...

buffer是新配的啊？这个应该没问题，即使是旧的，我以前用的也没问题啊
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10楼2009-12-12 22:38:38
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