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lfgc8505

金虫 (小有名气)

TAE缓冲液

引用回帖:
Originally posted by gaozx123 at 2010-02-02 15:33:46:
你用的TAE缓冲液还是TBE缓冲液,回收的话最好用TAE吧。

TAE缓冲液
41楼2010-02-04 01:01:07
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lansha8331

无虫 (小有名气)

换威格拉斯公司的(Vigorous)胶回收,50bp-20kb的片段都没问题
42楼2010-03-18 11:08:58
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changqingx

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
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Originally posted by buster at 2010-01-25 16:29:15:
或许可以注意一下离心的时间和转速  刚加入的时候可以用相对低的转速(5,000g
)  之后漂洗的时候用高一点的(8,000g)  最后洗脱再增加 (11,000g)
这是以前用过的一个进口的试剂盒的方法   不过像TIANGEN那 ...

你好,我现在也遇到和楼主一样的问题,胶回收前跑了一下胶,条带很亮(1μL的),一回收浓度只在5~20ng之间,之后要做T4连接,浓度太低连不上。我回收的是载体的DNA,所以现在苦于找不到错在哪儿,试剂盒换过几次,效果差不多。我刚才看你写的说离心时间也有影响,是吗?
43楼2010-05-21 17:46:25
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changqingx

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lfgc8505 at 2009-12-11 23:07:13:
小虫,最近遇到一个很奇怪的问题,最近在做DNA琼脂糖凝胶回收时,总是回收不到,每次测得的回收DNA量都只有几纳克,而DNA 凝胶电泳,条带很亮,切胶没问题。而且用了QIANGEN ,TIANGEN, TAKARA的试剂盒,都不行,而 ...

你好,我想问下,你提的问题现在解决了吗?我想借鉴下你的经验,因为我现在也碰到和你一样的问题,苦于找不到原因。请多多指教,谢谢
44楼2010-05-21 17:49:47
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lfgc8505

金虫 (小有名气)

你注意一下温度!

引用回帖:
Originally posted by changqingx at 2010-05-21 17:46:25:

你好,我现在也遇到和楼主一样的问题,胶回收前跑了一下胶,条带很亮(1μL的),一回收浓度只在5~20ng之间,之后要做T4连接,浓度太低连不上。我回收的是载体的DNA,所以现在苦于找不到错在哪儿,试剂盒换过几 ...

我认为三点很重要:
1 溶胶后温度降至室温再上柱
2 最后一步洗脱后腰尽量长的吹干,以挥发乙醇(对后面的连接影响很大)
3 最后一步EB洗脱时,一定要加热至不低于70度,并放置3分钟以上!
其他的不是很重要,按说明书做就行,时间充足的话,每加一种buffer,尽量长的放置.
45楼2010-05-21 21:38:52
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lfgc8505

金虫 (小有名气)

你可以试试~

引用回帖:
Originally posted by changqingx at 2010-05-21 17:49:47:

你好,我想问下,你提的问题现在解决了吗?我想借鉴下你的经验,因为我现在也碰到和你一样的问题,苦于找不到原因。请多多指教,谢谢

我认为三点很重要:
1 溶胶后温度降至室温再上柱
2 最后一步洗脱后腰尽量长的吹干,以挥发乙醇(对后面的连接影响很大)
3 最后一步EB洗脱时,一定要加热至不低于70度,并放置3分钟以上!
其他的不是很重要,按说明书做就行,时间充足的话,每加一种buffer,尽量长的放置.
46楼2010-05-21 21:39:25
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15261561986

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
18532971楼: Originally posted by lfgc8505 at 2010-05-21 21:38:52
我认为三点很重要:
1 溶胶后温度降至室温再上柱
2 最后一步洗脱后腰尽量长的吹干,以挥发乙醇(对后面的连接影响很大)
3 最后一步EB洗脱时,一定要加热至不低于70度,并放置3分钟以上!
其他的不是很重要, ...

加 EB洗脱时要70°,这么高?
慢慢来,沉下气来。。
47楼2012-12-26 22:51:41
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三吉草

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
看了这么多人的回复,真是众说纷纭。我目前也遇到类似的问题,楼上说的我都有注意,还有没有什么特别需要注意的啊?
48楼2013-07-06 00:26:10
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xiaofei1712

铁虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
太惆怅了,我换了试剂盒也是。但是16ug,酶切回收只有1ug
49楼2013-07-12 17:25:54
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learnenlish

铜虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主在吗,我最近也遇到这样的问题,条带很亮,但是回收回来只有几纳克的量,咋回事啊?求楼主解救啊~
50楼2013-09-23 15:07:02
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