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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA琼脂糖凝胶回收，为什么回收率太低！
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siren1214

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
挂柱多挂几次， 我一般都是把过下来的液体再吸起来再过一次，如此反复几次。
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21楼2009-12-14 11:24:02
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hooter86

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
现在的天气冷，温度低，有些溶液内的溶质都结晶析出了。建议在用溶液前先用水浴加热下。
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22楼2009-12-14 15:11:43
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lfgc8505

金虫 (小有名气)

这个问题我们也想过了，也试过了，但是还是不行！

引用回帖:
Originally posted by hooter86 at 2009-12-14 15:11:
现在的天气冷，温度低，有些溶液内的溶质都结晶析出了。建议在用溶液前先用水浴加热下。

这个问题我们也想过了，也试过了，但是还是不行！
不过还是谢谢你的建议！
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23楼2009-12-15 23:46:28
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cll1024

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢交流~~ 2010-05-21 20:04:14
胶回收中需要注意几点：
1.切胶时尽量切除不含目的片段的多余胶块，每管胶块最好不多余400mg;
2.溶胶一定要彻底，可以适当延长溶胶的时间；
3.洗脱液的加入量可以根据你PCR产物的浓度进行调整，如果觉得PCR产物浓度不大，可以适当减少洗脱液的加入量；
4.PCR产物可以同时多扩增几管，切胶后的分别溶胶，几管溶胶液同时过同一个柱子，可以提高回收产物的浓度。
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24楼2009-12-16 16:37:14
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lfgc8505

金虫 (小有名气)

是啊，这些我也注意了，而且我的条带很亮的。

引用回帖:
Originally posted by cll1024 at 2009-12-16 16:37:
胶回收中需要注意几点：
1.切胶时尽量切除不含目的片段的多余胶块，每管胶块最好不多余400mg;
2.溶胶一定要彻底，可以适当延长溶胶的时间；
3.洗脱液的加入量可以根据你PCR产物的浓度进行调整，如果觉得PCR产物 ...

是啊，这些我也注意了，而且我的条带很亮的。
不过还是谢谢你的建议，谢谢~
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25楼2009-12-16 20:46:08
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anyanqiu

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以把回收的各种溶液40度左右的水温一下，再者，溶完胶后加入一定量的异丙醇，效果比较好。
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26楼2009-12-17 10:15:33
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neon_alone

木虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):欢迎多多交流~~ 2010-05-21 20:04:59
我最近也在做，效果还不错啊。
我们用的也是天根的试剂盒，我建议你1.溶胶后的温度
2.还有漂洗后，空离心2min,之后最好在超净台将管开口横放吹个15分钟左右，要让乙醇挥干。
3.而且试剂盒上写的步骤，比如胶的吸附，漂洗，洗脱，最好放5min再离心，不要立刻离心，效果会好些吧。
4.问下你最后浓度是多少，其实一般20ug/ml就可以了

希望实验顺利！
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27楼2009-12-17 19:58:18
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lfgc8505

金虫 (小有名气)

你说的这些我基本也都注意到了，

引用回帖:
Originally posted by neon_alone at 2009-12-17 19:58:
我最近也在做，效果还不错啊。
我们用的也是天根的试剂盒，我建议你1.溶胶后的温度
2.还有漂洗后，空离心2min,之后最好在超净台将管开口横放吹个15分钟左右，要让乙醇挥干。
3.而且试剂盒上写的步骤，比如胶的 ...

你说的这些我基本也都注意到了，但是效果还是不理想，浓度一般都是5、6纳克，而且260/280值都很大，远大于2.
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28楼2009-12-17 23:08:15
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sand0811

金虫 (初入文坛)
试试omega?
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29楼2009-12-18 14:01:26
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bioxixi

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):感谢分享~~ 2010-05-21 20:06:17
1、切胶后一定要充分溶解
2、中间过程严格按操作说明做
3、最后在柱子上吸附的时候可以适当增加一点时间
4、洗脱前一定要晾干，至少要闻不到酒精味，可以温浴促进乙醇挥发
5、洗脱液可以预先加热，并推荐洗两遍

可能是某一步骤的问题，你仔细检查下，另外，不知道你回收的片段是多大的。。。
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30楼2009-12-18 14:07:59
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