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lfgc8505

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA琼脂糖凝胶回收,为什么回收率太低!已有8人参与

小虫,最近遇到一个很奇怪的问题,最近在做DNA琼脂糖凝胶回收时,总是回收不到,每次测得的回收DNA量都只有几纳克,而DNA 凝胶电泳,条带很亮,切胶没问题。而且用了QIANGEN ,TIANGEN, TAKARA的试剂盒,都不行,而之前十月份的时候回收的还可以。
哪位高手知道的,请多多指教!
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lfgc8505

金虫 (小有名气)

是啊,这些我也注意了,而且我的条带很亮的。

引用回帖:
Originally posted by cll1024 at 2009-12-16 16:37:
胶回收中需要注意几点:
1.切胶时尽量切除不含目的片段的多余胶块,每管胶块最好不多余400mg;
2.溶胶一定要彻底,可以适当延长溶胶的时间;
3.洗脱液的加入量可以根据你PCR产物的浓度进行调整,如果觉得PCR产物 ...

是啊,这些我也注意了,而且我的条带很亮的。
不过还是谢谢你的建议,谢谢~
25楼2009-12-16 20:46:08
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
buffer不新鲜了?我指配胶和电泳的buffer
2楼2009-12-11 23:57:47
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tianpingpe

新虫 (小有名气)

你的琼脂糖有没有问题?电泳buffer有问题没有?如果切的胶太厚,也会降低你的回收效率,你洗脱的时候保证自己加的超纯水在柱子的中间吗?加了以后静置3min,能提高回收率,洗脱后可以将洗脱后的超纯水再加入进去再洗脱一次;
3楼2009-12-12 10:29:12
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hyde0706

木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
胶的量不能太大,最好薄一些,切的时候尽量少切一些周围的胶。洗脱的时候水可以加热,有利于提高回收效率。
4楼2009-12-12 10:48:50
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