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lfgc8505

金虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 754
散金: 40
帖子: 70
在线: 11.3小时
虫号: 432774
注册: 2007-08-12
性别: GG
专业: 疫苗学

[交流] 【求助/交流】DNA琼脂糖凝胶回收，为什么回收率太低！已有8人参与

小虫，最近遇到一个很奇怪的问题，最近在做DNA琼脂糖凝胶回收时，总是回收不到，每次测得的回收DNA量都只有几纳克，而DNA 凝胶电泳，条带很亮，切胶没问题。而且用了QIANGEN ,TIANGEN, TAKARA的试剂盒，都不行，而之前十月份的时候回收的还可以。
哪位高手知道的，请多多指教！

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1楼 2009-12-11 23:07:13

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lfgc8505

金虫 (小有名气)

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你注意一下温度！

引用回帖:

Originally posted by changqingx at 2010-05-21 17:46:25:

你好，我现在也遇到和楼主一样的问题，胶回收前跑了一下胶，条带很亮（1μL的），一回收浓度只在5~20ng之间，之后要做T4连接，浓度太低连不上。我回收的是载体的DNA，所以现在苦于找不到错在哪儿，试剂盒换过几 ...

我认为三点很重要：
1 溶胶后温度降至室温再上柱
2 最后一步洗脱后腰尽量长的吹干，以挥发乙醇（对后面的连接影响很大）
3 最后一步EB洗脱时，一定要加热至不低于70度，并放置3分钟以上！
其他的不是很重要，按说明书做就行，时间充足的话，每加一种buffer,尽量长的放置.