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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】DNA琼脂糖凝胶回收，为什么回收率太低！
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lfgc8505

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】DNA琼脂糖凝胶回收，为什么回收率太低！ 已有8人参与

小虫，最近遇到一个很奇怪的问题，最近在做DNA琼脂糖凝胶回收时，总是回收不到，每次测得的回收DNA量都只有几纳克，而DNA 凝胶电泳，条带很亮，切胶没问题。而且用了QIANGEN ,TIANGEN, TAKARA的试剂盒，都不行，而之前十月份的时候回收的还可以。
哪位高手知道的，请多多指教！
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1楼 2009-12-11 23:07:13
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lfgc8505

金虫 (小有名气)

你注意一下温度！

引用回帖:
Originally posted by changqingx at 2010-05-21 17:46:25:

你好，我现在也遇到和楼主一样的问题，胶回收前跑了一下胶，条带很亮（1μL的），一回收浓度只在5~20ng之间，之后要做T4连接，浓度太低连不上。我回收的是载体的DNA，所以现在苦于找不到错在哪儿，试剂盒换过几 ...

我认为三点很重要：
1 溶胶后温度降至室温再上柱
2 最后一步洗脱后腰尽量长的吹干，以挥发乙醇（对后面的连接影响很大）
3 最后一步EB洗脱时，一定要加热至不低于70度，并放置3分钟以上！
其他的不是很重要，按说明书做就行，时间充足的话，每加一种buffer,尽量长的放置.
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45楼2010-05-21 21:38:52
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
buffer不新鲜了？我指配胶和电泳的buffer
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2楼2009-12-11 23:57:47
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tianpingpe

新虫 (小有名气)
你的琼脂糖有没有问题？电泳buffer有问题没有？如果切的胶太厚，也会降低你的回收效率，你洗脱的时候保证自己加的超纯水在柱子的中间吗？加了以后静置3min，能提高回收率，洗脱后可以将洗脱后的超纯水再加入进去再洗脱一次；
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3楼2009-12-12 10:29:12
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hyde0706

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
胶的量不能太大，最好薄一些，切的时候尽量少切一些周围的胶。洗脱的时候水可以加热，有利于提高回收效率。
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4楼2009-12-12 10:48:50
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