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llzhang2012

[交流] 克隆基因全长引物设计问题已有9人参与

已知一序列全长,如何根据此序列设计引物克隆出全长,我是新手,麻烦各位详细介绍一下设计全长引物的步骤,最近实验急需,非常感谢!!!
  我以前克隆过片段,没有做过全长,引物设计的一些基本原则都已了解,但是设计全长引物一点都不懂,劳烦各位,谢谢!
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zhengqiuyang

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
lstt09nk(金币+2): 感谢参与,欢迎常来 2011-04-25 20:48:30
你可以选择T载体进行连接,可以提高克隆的效率。或者可以根据你的载体上的酶切位点,最好是选择不一样的两个酶切位点,这样可以避免克隆进去的目的片段方向反了。关于保护碱基的话,可以去网上搜索一下,针对不同的限制性内切酶都有提供不同的保护碱基的。还有在你的起始密码子ATG之前一般要加一端GCCACC,可以增强表达效率,如果你的目的基因需要添加标签的话,注意要去掉你的终止密码子。
26楼2011-04-25 14:34:07
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