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llzhang2012

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[交流] 克隆基因全长引物设计问题已有9人参与

已知一序列全长，如何根据此序列设计引物克隆出全长，我是新手，麻烦各位详细介绍一下设计全长引物的步骤，最近实验急需，非常感谢！！！
我以前克隆过片段，没有做过全长，引物设计的一些基本原则都已了解，但是设计全长引物一点都不懂，劳烦各位，谢谢！

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1楼2009-11-04 14:59:57

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zhengqiuyang

新虫 (初入文坛)

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★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
lstt09nk(金币+2): 感谢参与，欢迎常来 2011-04-25 20:48:30

你可以选择T载体进行连接，可以提高克隆的效率。或者可以根据你的载体上的酶切位点，最好是选择不一样的两个酶切位点，这样可以避免克隆进去的目的片段方向反了。关于保护碱基的话，可以去网上搜索一下，针对不同的限制性内切酶都有提供不同的保护碱基的。还有在你的起始密码子ATG之前一般要加一端GCCACC，可以增强表达效率，如果你的目的基因需要添加标签的话，注意要去掉你的终止密码子。