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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 毕赤酵母表达（总是整合不上）
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yuweibest

木虫 (正式写手)

[交流] 毕赤酵母表达（总是整合不上）已有7人参与

我正在做毕赤酵母表达，前面的一些步骤应该没什么问题。重组质粒已经构建好，就是在重组质粒线性化并且电转化毕赤酵母时，在相应的抗性平板上总是张不出菌落！！。也就是线性整合不上去。
  请问哪位大侠做过这方面，给点提高转化率的建议和改进步骤。
   我用的PgapzαA载体，目的片段为2.9KB（比较大）

[ Last edited by silicare on 2011-5-19 at 21:22 ]
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1楼2009-08-13 17:31:14
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yuweibest

木虫 (正式写手)
我就是这么搞的！山梨醇1-2小时！完全按照毕赤酵母操作手册上做的！我在考虑是不是片段太大，2.9KB！载体本身也就3.1KB！下次我把质粒和细胞全搞浓一点试一试！
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10楼2009-08-14 20:58:16
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银杏下

金虫 (小有名气)
★
yuweibest(金币+1,VIP+0): 12-22 10:16
我之前做过毕赤酵母的电转，每次做基本上都成功了，不知道你是怎么处理感受态细胞的，如果这个步骤出现问题很可能出现无法转化成果，另外还要注意线性化的质粒浓度要高些。你的载体2.9KB已经算是最小的一类的毕赤酵母载体了，所以不要担心载体的问题。
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2楼2009-08-13 18:33:36
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yuweibest

木虫 (正式写手)
感受态，我就是按照毕赤酵母操作手册上，离心加水再离心，加山梨醇再离心！不是载体2.9KB！而是目的基因2.9KB！
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3楼2009-08-13 19:42:51
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
电转时的参数（电压，时间）
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4楼2009-08-13 20:35:48
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