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yuweibest

木虫 (正式写手)

[交流] 毕赤酵母表达(总是整合不上)已有7人参与

我正在做毕赤酵母表达,前面的一些步骤应该没什么问题。重组质粒已经构建好,就是在重组质粒线性化并且电转化毕赤酵母时,在相应的抗性平板上总是张不出菌落!!。也就是线性整合不上去。
  请问哪位大侠做过这方面,给点提高转化率的建议和改进步骤。
   我用的PgapzαA载体,目的片段为2.9KB(比较大)

[ Last edited by silicare on 2011-5-19 at 21:22 ]
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

电转时的参数(电压,时间)
4楼2009-08-13 20:35:48
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

★ ★
yuweibest(金币+1,VIP+0):感谢你的回答!能再来看一下,具体指正一下吗? 8-14 09:36
yuweibest(金币+1,VIP+0): 12-22 10:16
参数很正常
酵母菌浓度尽量高一点
载体尽量不含盐
应该没有问题
7楼2009-08-14 08:14:45
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)

★ ★
yuweibest(金币+1,VIP+0):谢了!总想改进下!苦于没方法! 8-14 20:58
yuweibest(金币+1,VIP+0): 12-22 10:16
如果是抗性筛选的话,电击完加入山梨醇后在30度培养1-2小时再涂板
细胞浓度尽量高一点
9楼2009-08-14 09:49:29
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