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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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stella0xhx

新虫 (小有名气)

[交流] 基因带六个his标签,蛋白纯化时为何挂不上镍柱 已有9人参与

克隆了一个肠激酶的基因,设计引物时加了6个his,蛋白可溶性还行,可是做蛋白纯化时,用的镍柱,但是目标蛋白就是挂不上柱,磷酸盐和tris-Hcl 的缓冲液都试过了,没法,请教各位高手,怎么办啊?
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txstbbm

铁虫 (小有名气)

★ ★
amisking(金币+2,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-12 10:51
可能情况:
1,ORF不完整或者不是预期的ORF,His没表达出来
2,His被空间结构所掩盖,建议变性后再过柱
3楼2009-07-12 09:49:01
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zplipeng

金虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
不懂啊。。。。
等待高人回答
加油哦↖(^ω^)↗,O(∩_∩)O哈哈~
2楼2009-07-12 09:47:04
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cloudy3197

银虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1,VIP+0):欢迎发帖交流! 7-12 11:27
同一ls,可能跟蛋白空间结构有关,变性后再上柱。

另外,是否是柱子本身的问题,也可以重新脱镍挂镍后再看看~~
4楼2009-07-12 11:18:22
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北国佳人

铜虫 (小有名气)

浅浅的指导以下


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1.标蛋白是否表达HIS 标签..
2. 柱子是新的还是以前用过的,旧的应该很好的处理一下,
3.缓冲液很重要,蛋白与柱子结合是靠离子螯合,反应环境很重要
好好做好每一步!
努力的小蜜蜂
5楼2009-07-12 11:31:47
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