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木叶林森

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR凝胶电泳图分析 已有3人参与

如图,提取小鼠DNA后PCR凝胶电泳,结果出现两条带,上面的条带是目的DNA,但下面的那些又粗又亮的条带是什么啊?还有这样的PCR产物能用于基因测序吗?

PCR凝胶电泳图分析
DNA.jpg
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hongyingwu

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
木叶林森: 金币+8, ★★★很有帮助 2017-11-24 15:39:02
前面的一般是引物二聚体,一般都有。PCR产物测序一般需要对应产物切胶纯化再测序吧。
2楼2017-11-22 11:25:39
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
木叶林森: 金币+15, ★★★很有帮助 2017-11-24 15:38:20
第一个问题,又粗又亮的是引物二聚体,既然引物已经合成,可以通过做一个退货温度梯度来尽量减少其形成。第二个问题,不知道你上样量是多少,目的条带亮度很弱。你可以将其送到测序公司试试看能否测出来。

发自小木虫Android客户端
3楼2017-11-22 11:51:42
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木叶林森

铜虫 (小有名气)

4楼2017-11-24 15:29:29
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木叶林森

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 渊博震天 at 2017-11-22 11:51:42
第一个问题,又粗又亮的是引物二聚体,既然引物已经合成,可以通过做一个退货温度梯度来尽量减少其形成。第二个问题,不知道你上样量是多少,目的条带亮度很弱。你可以将其送到测序公司试试看能否测出来。
...

取了2.5uL上样

发自小木虫Android客户端
5楼2017-11-24 15:30:03
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木叶林森

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hongyingwu at 2017-11-22 11:25:39
前面的一般是引物二聚体,一般都有。PCR产物测序一般需要对应产物切胶纯化再测序吧。

测序直接送PCR产物就行,不需要我自己纯化后再送测

发自小木虫Android客户端
6楼2017-11-24 15:34:52
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

引用回帖:
6楼: Originally posted by 木叶林森 at 2017-11-24 15:34:52
测序直接送PCR产物就行,不需要我自己纯化后再送测
...

对的,送样的时候说明即可。

发自小木虫Android客户端
7楼2017-11-24 17:21:46
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aliaaxmu2016

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

问题:
1.Marker都不亮;
2.条带没有刀切般的感觉,弥散严重;
解决:
1.Marker 按说明量加,有量化作用,再依照marker亮度拍照;
2.配一个高浓度的胶;
3.如果还不行,就是PCR扩增量太少,建议模板量单因素或者退火温度实验;
8楼2017-11-27 10:27:13
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