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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于内参引物的问题
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雪鸢-lx

木虫 (小有名气)

[求助] 关于内参引物的问题已有2人参与

刚准备做拟南芥的定量，内参引物是采取AtACT2序列设计的，但是普通PCR却未能扩增出条带，梯度什么的都试过了，都没有，我的RNA提取还行，浓度和电泳结果都显示可以，然后做了反转录，然后再去PCR的，结果就是没条带，我用的ACT2序列的CDS设计的引物，是不是应该用cDNA序列设计啊？但是我看文献里面设计的引物也是CDS设计的引物，应该是没有问题的啊，有没有大神给点建议，应该怎么做，我只有把内参基因能用PCR扩增出来了，才能去做定量啊，烦死了
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1楼2017-08-15 21:21:40
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-08-16 07:53:38
获得看家基因的两个方法:
1.借鉴已成功的实验例子，如搜索做real-time定量的文章一般都可以有发现。
2.做大量的实验验证,这个方法很麻烦的。
赞一下(1人) 回复此楼
及时行乐，人生不留遗憾！
3楼2017-08-15 23:49:13
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yun云飞fei

新虫 (小有名气)
以基因组为模板能扩增出内参基因吗

发自小木虫Android客户端
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2楼2017-08-15 22:46:51
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gufeng2008

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
cDNA设计引物，重新PCR.
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2017-08-16 13:11:25
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