| 查看: 1694 | 回复: 0 | ||
qichong木虫 (小有名气)
|
[求助]
相对定量qPCR中关于no RT control的问题
|
|
我们的目标基因序列是染色体上一段转录活性较高的区域，长度大约有100bp，针对序列两端设计了引物扩增，以核糖体蛋白L37作为内参基因。 问题是：逆转录后样品的靶基因序列CT值是16，no RT control 样品CT值居然也达到了20？！ 我开始觉得是DNA污染导致no RT control 样品CT值过高，仔细回顾发觉不太可能。 原因是1、trizol提取RNA后测得OD值为1.9，似乎没有DNA、蛋白或有机溶剂残留； 2、逆转录试剂盒自带gDNAremover去除基因组DNA反应，我们予以采用； 3、逆转录后样品的L37 CT值是18，no RT control 样品L37 CT值是37，从内参来看DNA消化完全。 其它背景：溶解曲线一致、重复性一致 恳请有经验的大神仔细解答，有可能是什么原因，非常感谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有175人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
10