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qichong木虫 (小有名气)
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相对定量qPCR中关于no RT control的问题
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我们的目标基因序列是染色体上一段转录活性较高的区域，长度大约有100bp，针对序列两端设计了引物扩增，以核糖体蛋白L37作为内参基因。 问题是：逆转录后样品的靶基因序列CT值是16，no RT control 样品CT值居然也达到了20？！ 我开始觉得是DNA污染导致no RT control 样品CT值过高，仔细回顾发觉不太可能。 原因是1、trizol提取RNA后测得OD值为1.9，似乎没有DNA、蛋白或有机溶剂残留； 2、逆转录试剂盒自带gDNAremover去除基因组DNA反应，我们予以采用； 3、逆转录后样品的L37 CT值是18，no RT control 样品L37 CT值是37，从内参来看DNA消化完全。 其它背景：溶解曲线一致、重复性一致 恳请有经验的大神仔细解答，有可能是什么原因，非常感谢！ |
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