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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 基因克隆3’RACE
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)

[求助] 基因克隆3’RACE 已有1人参与

本人实验室新手一个，现在克隆基因遇到了瓶颈，寻求大牛帮助。
我们实验室克隆基因一般都是分三段来做，中间片段加上5’和3‘，现在有两个基因我都克隆的只剩下3’了，可是我搞了快有两个月还是做不出来，很困惑，明明很简单的东西，就是不出结果，急的很。
具体情况是这样，本来刚开始时候，PCR还能有一些非特异带，后来做的做的，连非特异带都没有了，每次跑电泳，胶上都是仅有Mark,或者偶然有些二聚体，这是什么原因，好急好急，恳请各位指点一二，

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1楼 2017-05-21 15:52:40
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 合欢花的忧伤 at 2017-05-21 21:58:28
我特别想知道你5,怎么做出来的

5’我就跑了三四次PCR就有了呀

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3楼2017-05-24 20:10:01
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合欢花的忧伤

新虫 (著名写手)
我特别想知道你5,怎么做出来的

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2楼2017-05-21 21:58:28
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 洛神惟惟 at 2017-05-24 20:10:01
5’我就跑了三四次PCR就有了呀
...

对Tm值微调，

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4楼2017-05-24 20:11:18
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steamsn

金虫 (小有名气)
重新设计引物

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我命由我不由天
5楼2017-05-24 22:48:06
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