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洛神惟惟

新虫 (正式写手)

[求助] 基因克隆3’RACE已有1人参与

本人实验室新手一个,现在克隆基因遇到了瓶颈,寻求大牛帮助。
我们实验室克隆基因一般都是分三段来做,中间片段加上5’和3‘,现在有两个基因我都克隆的只剩下3’了,可是我搞了快有两个月还是做不出来,很困惑,明明很简单的东西,就是不出结果,急的很。
具体情况是这样,本来刚开始时候,PCR还能有一些非特异带,后来做的做的,连非特异带都没有了,每次跑电泳,胶上都是仅有Mark,或者偶然有些二聚体,这是什么原因,好急好急,恳请各位指点一二,

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合欢花的忧伤

新虫 (著名写手)

我特别想知道你5,怎么做出来的

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2楼2017-05-21 21:58:28
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 合欢花的忧伤 at 2017-05-21 21:58:28
我特别想知道你5,怎么做出来的

5’我就跑了三四次PCR就有了呀

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3楼2017-05-24 20:10:01
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 洛神惟惟 at 2017-05-24 20:10:01
5’我就跑了三四次PCR就有了呀
...

对Tm值微调,

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4楼2017-05-24 20:11:18
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steamsn

金虫 (小有名气)

我命由我不由天
5楼2017-05-24 22:48:06
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steamsn

金虫 (小有名气)

我命由我不由天
6楼2017-05-24 22:48:11
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laolaohutu

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

5’Race比3‘Race难做很多,建议检查下序列和引物是不是对,考虑重新设计引物,基本上问题不大
请享受无法回避的痛苦
7楼2017-05-25 15:48:22
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洛神惟惟

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by laolaohutu at 2017-05-25 15:48:22
5’Race比3‘Race难做很多,建议检查下序列和引物是不是对,考虑重新设计引物,基本上问题不大

重新设计引物吗,可是我现在用的两对引物都是能跑出来目的片段的,由于当时某种原因就没切胶,后来就再也跑不出来了

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8楼2017-05-25 15:54:06
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star013

新虫 (知名作家)


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9楼2017-05-26 10:40:13
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fangkonging

新虫 (小有名气)

我也遇到这样的问题,你的解决了吗
10楼2018-03-16 17:31:58
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