24小时热门版块排行榜    

查看: 2262  |  回复: 17

15978432804

新虫 (小有名气)

[求助] 如何合理的设计引物 已有1人参与

我刚开始做实验就遇到了很头疼的事,我做的是同源克隆,现在要扩一个基因的CDS区的全长,但是在设计引物时走不下去了。那个CDS区有2000bp左右,设计出来的引物得分都很低(我用的是oligo7),整体上引物不是太好,我就先试试看能不能扩出来,但试了好长时间都没结果,TM梯度都试了,原料都没问题,换个别的基因引物就有结果,在相关时间内也表达。也不知道该怎么办了,我设计引物的技术不行,一样能帮帮我,给予指点!!

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lusandanooo

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
15978432804: 金币+2, 有帮助 2017-03-31 23:34:12
以我的经验,做巢式PCR,估计你这个基因附近的序列不适合做引物,可以多选上下游1000bp,设计外巢引物,换P长片段的酶,比如LA taq,Primer star这种,内巢引物用你现在设计的这个就行了。我之前也是P一个3k多的片段P不出来,试了上面人说的方法都没用,最后巢式P出来的。
毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
13楼2017-03-31 09:45:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

寒冰fire

银虫 (小有名气)

使用降落pcr怎么样
doit
3楼2017-03-30 09:07:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伊巴代提

新虫 (初入文坛)

可以试一下降落式PCR或者延长一下最后一步骤中72℃。

发自小木虫Android客户端
12楼2017-03-31 07:43:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

15978432804

新虫 (小有名气)

2楼2017-03-30 08:03:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15978432804

新虫 (小有名气)

4楼2017-03-30 21:33:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15978432804

新虫 (小有名气)

5楼2017-03-30 23:10:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15978432804

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 寒冰fire at 2017-03-30 09:07:53
使用降落pcr怎么样

这个不太会,也不知道实验室有人会没,不过可以试一试

发自小木虫Android客户端
6楼2017-03-30 23:20:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sanjingmeng

金虫 (小有名气)

我是钉子我怕锤子
7楼2017-03-30 23:25:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mochenmi

铜虫 (小有名气)

如果可以的话,把序列放上,让大家帮忙设计

发自小木虫IOS客户端
8楼2017-03-30 23:31:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15978432804

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by mochenmi at 2017-03-30 23:31:41
如果可以的话,把序列放上,让大家帮忙设计

那我明天放上吧

发自小木虫Android客户端
9楼2017-03-31 00:08:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

15978432804

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by sanjingmeng at 2017-03-30 23:25:43
用简并引物吧

这个不是太懂,不过我先自己了解了解

发自小木虫Android客户端
10楼2017-03-31 00:10:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 15978432804 的主题更新
信息提示
请填处理意见