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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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15978432804

实习版主

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

[求助] 如何合理的设计引物 已有1人参与

我刚开始做实验就遇到了很头疼的事,我做的是同源克隆,现在要扩一个基因的CDS区的全长,但是在设计引物时走不下去了。那个CDS区有2000bp左右,设计出来的引物得分都很低(我用的是oligo7),整体上引物不是太好,我就先试试看能不能扩出来,但试了好长时间都没结果,TM梯度都试了,原料都没问题,换个别的基因引物就有结果,在相关时间内也表达。也不知道该怎么办了,我设计引物的技术不行,一样能帮帮我,给予指点!!

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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lusandanooo

版主

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
15978432804: 金币+2, 有帮助 2017-03-31 23:34:12
以我的经验,做巢式PCR,估计你这个基因附近的序列不适合做引物,可以多选上下游1000bp,设计外巢引物,换P长片段的酶,比如LA taq,Primer star这种,内巢引物用你现在设计的这个就行了。我之前也是P一个3k多的片段P不出来,试了上面人说的方法都没用,最后巢式P出来的。
毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
13楼2017-03-31 09:45:28
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寒冰fire

管理员

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使用降落pcr怎么样
doit
3楼2017-03-30 09:07:53
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伊巴代提

实习版主

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可以试一下降落式PCR或者延长一下最后一步骤中72℃。

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12楼2017-03-31 07:43:19
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普通回帖

15978432804

专家顾问

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2楼2017-03-30 08:03:49
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15978432804

超级版主

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4楼2017-03-30 21:33:36
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15978432804

专家顾问

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

5楼2017-03-30 23:10:31
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15978432804

超级版主

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引用回帖:
3楼: Originally posted by 寒冰fire at 2017-03-30 09:07:53
使用降落pcr怎么样

这个不太会,也不知道实验室有人会没,不过可以试一试

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6楼2017-03-30 23:20:59
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sanjingmeng

超级版主

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我是钉子我怕锤子
7楼2017-03-30 23:25:43
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mochenmi

专家顾问

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如果可以的话,把序列放上,让大家帮忙设计

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8楼2017-03-30 23:31:41
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15978432804

管理员

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引用回帖:
8楼: Originally posted by mochenmi at 2017-03-30 23:31:41
如果可以的话,把序列放上,让大家帮忙设计

那我明天放上吧

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9楼2017-03-31 00:08:06
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15978432804

主管区长

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引用回帖:
7楼: Originally posted by sanjingmeng at 2017-03-30 23:25:43
用简并引物吧

这个不是太懂,不过我先自己了解了解

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10楼2017-03-31 00:10:49
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