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15978432804

新虫 (小有名气)

[求助] 如何合理的设计引物 已有1人参与

我刚开始做实验就遇到了很头疼的事,我做的是同源克隆,现在要扩一个基因的CDS区的全长,但是在设计引物时走不下去了。那个CDS区有2000bp左右,设计出来的引物得分都很低(我用的是oligo7),整体上引物不是太好,我就先试试看能不能扩出来,但试了好长时间都没结果,TM梯度都试了,原料都没问题,换个别的基因引物就有结果,在相关时间内也表达。也不知道该怎么办了,我设计引物的技术不行,一样能帮帮我,给予指点!!

@biostar2009 @飞约疯人院 @wizardfan @youlinglyw 发自小木虫Android客户端
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lusandanooo

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
15978432804: 金币+2, 有帮助 2017-03-31 23:34:12
以我的经验,做巢式PCR,估计你这个基因附近的序列不适合做引物,可以多选上下游1000bp,设计外巢引物,换P长片段的酶,比如LA taq,Primer star这种,内巢引物用你现在设计的这个就行了。我之前也是P一个3k多的片段P不出来,试了上面人说的方法都没用,最后巢式P出来的。
毕了业真开心嘻嘻嘻嘻嘻
13楼2017-03-31 09:45:28
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15978432804

新虫 (小有名气)

2楼2017-03-30 08:03:49
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寒冰fire

银虫 (小有名气)

使用降落pcr怎么样
doit
3楼2017-03-30 09:07:53
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15978432804

新虫 (小有名气)

4楼2017-03-30 21:33:36
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