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[求助]
之前做过的PCR重复不出来，求大神帮忙看一下？？急！急！急！不然就得换导师了。 已有3人参与
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这是设计的大肠杆菌DH5α引物 F：5，CGCGGATCCATGGCTGTTACTAATGTCG 3， R：5，CCGCTCGAGTTAAGCGGATTTTTTCG 3， PCR体系（25ul): 模板 ： 2ul Taq酶 ： 0.125ul primer : 0.625ul ：0.625ul 10xbuffer : 2.5ul 2.5mMdNTP : 2ul dd水 ： 17.125ul 条件：1. 95℃ 4min 2. 95℃ 40s 61℃ 30s 72℃ 3min 3. 72℃ 10min 这是体系和条件，求大神帮忙，帮我找找原因，要崩溃了。。。。。   年前普通Taq酶P的条带.png  年前高保真酶primer starP出的条带.png  年后普通taq酶P的，没有条带.png  1.jpg  2.jpg |
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-28 07:43:53
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-03-28 07:43:53
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首先可以将模板跑个电泳看下模板是否被降解，其次稍微降低一下你的退火温度，降至55度，并提高下循环数，如33个循环，看看是否有目的片段扩增出来，如果有，将片段切下来纯化之后再当模板做一次pcr 发自小木虫Android客户端 |
6楼2017-03-28 00:43:17
科学小覃
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3楼2017-03-27 17:28:06
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