24小时热门版块排行榜    

查看: 5430  |  回复: 15

jinnini125

木虫 (小有名气)

[求助] 关于原核表达诱导条件 已有3人参与

本人用的是全式金的原核表达载体,根据说明书37度诱导,设置时间梯度3.4.5三个梯度,IPTG浓度设置0.6 0.8 1.0三个梯度。未诱导的作为对照跑SDS-PAGE胶,结果如图。目的条带大约26KD,MARKER指示带倒数第一是20KD左右,第二是29KD左右。

关于原核表达诱导条件


发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:15:38
应该是表达了,你收集菌体,裂解一下,分别跑一个裂解液上清和沉淀看是包涵体还是可溶性表达,一般情况下不用摸时间和IPTG浓度和温度梯度,37℃,4到6小时,iptg1mm就可以,做多了只是增加工作量,如果是包涵体表达,就需要考虑前面的因素了,你跑的这个胶没有太大意义,连未诱导的对照也没有,所以没法给你建议,做实验一定要设置阴性对照

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2017-03-23 23:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

楼主阴性那,第一次做的蛋白都要跑阴性的,也可能全都不是呀。
采菊东篱下,悠然见南山。
9楼2017-03-27 11:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

I苧檬

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:16:03
引用回帖:
8楼: Originally posted by jinnini125 at 2017-03-27 10:23:55
你好,我再问一下,由于是第一次做。裂解一下跑上清液和沉淀,那个裂解怎么做?
...

裂解不就是破碎细胞,用超声波细胞破碎仪。然后看看破碎后菌液有没有澄清,基本上澄清了就很少是包涵体,然后离心。取沉淀和上清,上清去纯化就好了。再跑胶看看有没有

发自小木虫IOS客户端
12楼2017-03-27 12:24:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

fengshen2005

银虫 (正式写手)

从左到右都是什么?

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-03-23 22:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengshen2005

银虫 (正式写手)

诱导温度只有37度?可以16度,28度啊

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2017-03-23 22:34:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinnini125

木虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by fengshen2005 at 2017-03-23 22:33:54
从左到右都是什么?

从左到右是0.6mM,0.8,1.0 IPTG,37度3小时。37度4小时。37度5小时。最后第十个是未诱导。

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-03-27 10:20:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinnini125

木虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by fengshen2005 at 2017-03-23 22:34:53
诱导温度只有37度?可以16度,28度啊

好的,谢谢。我正在设置温度梯度。以0.6的IPTG,4小时。设置16 28 37对照。

发自小木虫IOS客户端
6楼2017-03-27 10:21:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinnini125

木虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-23 23:17:24
应该是表达了,你收集菌体,裂解一下,分别跑一个裂解液上清和沉淀看是包涵体还是可溶性表达,一般情况下不用摸时间和IPTG浓度和温度梯度,37℃,4到6小时,iptg1mm就可以,做多了只是增加工作量,如果是包涵体表达 ...

右边最后一个是未诱导的对照。啥也没加过,就在4度冰箱放着来着。但是,没有做空载体对照。

发自小木虫IOS客户端
7楼2017-03-27 10:22:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinnini125

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by jinnini125 at 2017-03-27 10:22:58
右边最后一个是未诱导的对照。啥也没加过,就在4度冰箱放着来着。但是,没有做空载体对照。
...

你好,我再问一下,由于是第一次做。裂解一下跑上清液和沉淀,那个裂解怎么做?

发自小木虫IOS客户端
8楼2017-03-27 10:23:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinnini125

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 781055707 at 2017-03-27 11:24:32
楼主阴性那,第一次做的蛋白都要跑阴性的,也可能全都不是呀。

好的,谢谢楼主

发自小木虫IOS客户端
10楼2017-03-27 11:55:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jinnini125 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考博] 博士推荐 +5 花儿笑? 2026-02-21 6/300 2026-02-28 18:53 by nxgogo
[考研] 298求调剂 +6 人间唯你是清欢 2026-02-28 8/400 2026-02-28 18:52 by 人间唯你是清欢
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +3 ieewxg 2026-02-25 3/150 2026-02-28 18:25 by addressing
[考研] 高分子化学与物理调剂 +4 好好好1233 2026-02-28 5/250 2026-02-28 18:20 by liqiongjy
[教师之家] 版面费该交吗 +15 苹果在哪里 2026-02-22 18/900 2026-02-28 18:20 by mibaomingg
[考研] 材料调剂 +3 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 3/150 2026-02-28 18:06 by houyaoxu
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +3 弗格个 2026-02-28 5/250 2026-02-28 17:04 by sandychj
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +4 礼堂丁真258 2026-02-28 6/300 2026-02-28 16:18 by 求调剂zz
[考博] 26申博 +3 想申博! 2026-02-26 3/150 2026-02-28 16:07 by nxgogo
[考研] 295求调剂 +4 19171856320 2026-02-28 4/200 2026-02-28 13:39 by ms629
[考研] 290求调剂 +4 材料专硕调剂; 2026-02-28 5/250 2026-02-28 13:32 by houyaoxu
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[考研] 272求调剂 +3 田智友 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:31 by 王加浩to
[考研] 298求调剂 +4 axyz3 2026-02-28 4/200 2026-02-28 11:21 by wang_dand
[基金申请] 什么是人一生最重要的? +10 瞬息宇宙 2026-02-21 10/500 2026-02-27 08:46 by tfang
[基金申请] 面上可以超过30页吧? +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
请填处理意见