24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 5468  |  回复: 15

jinnini125

木虫 (小有名气)

[求助] 关于原核表达诱导条件 已有3人参与

本人用的是全式金的原核表达载体,根据说明书37度诱导,设置时间梯度3.4.5三个梯度,IPTG浓度设置0.6 0.8 1.0三个梯度。未诱导的作为对照跑SDS-PAGE胶,结果如图。目的条带大约26KD,MARKER指示带倒数第一是20KD左右,第二是29KD左右。

关于原核表达诱导条件


发自小木虫IOS客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:15:38
应该是表达了,你收集菌体,裂解一下,分别跑一个裂解液上清和沉淀看是包涵体还是可溶性表达,一般情况下不用摸时间和IPTG浓度和温度梯度,37℃,4到6小时,iptg1mm就可以,做多了只是增加工作量,如果是包涵体表达,就需要考虑前面的因素了,你跑的这个胶没有太大意义,连未诱导的对照也没有,所以没法给你建议,做实验一定要设置阴性对照

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

4楼2017-03-23 23:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

楼主阴性那,第一次做的蛋白都要跑阴性的,也可能全都不是呀。
采菊东篱下,悠然见南山。
9楼2017-03-27 11:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

I苧檬

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:16:03
引用回帖:
8楼: Originally posted by jinnini125 at 2017-03-27 10:23:55
你好,我再问一下,由于是第一次做。裂解一下跑上清液和沉淀,那个裂解怎么做?
...

裂解不就是破碎细胞,用超声波细胞破碎仪。然后看看破碎后菌液有没有澄清,基本上澄清了就很少是包涵体,然后离心。取沉淀和上清,上清去纯化就好了。再跑胶看看有没有

发自小木虫IOS客户端
12楼2017-03-27 12:24:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

fengshen2005

银虫 (正式写手)

从左到右都是什么?

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-03-23 22:33:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fengshen2005

银虫 (正式写手)

诱导温度只有37度?可以16度,28度啊

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2017-03-23 22:34:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinnini125

木虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by fengshen2005 at 2017-03-23 22:33:54
从左到右都是什么?

从左到右是0.6mM,0.8,1.0 IPTG,37度3小时。37度4小时。37度5小时。最后第十个是未诱导。

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-03-27 10:20:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinnini125

木虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by fengshen2005 at 2017-03-23 22:34:53
诱导温度只有37度?可以16度,28度啊

好的,谢谢。我正在设置温度梯度。以0.6的IPTG,4小时。设置16 28 37对照。

发自小木虫IOS客户端
6楼2017-03-27 10:21:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinnini125

木虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-23 23:17:24
应该是表达了,你收集菌体,裂解一下,分别跑一个裂解液上清和沉淀看是包涵体还是可溶性表达,一般情况下不用摸时间和IPTG浓度和温度梯度,37℃,4到6小时,iptg1mm就可以,做多了只是增加工作量,如果是包涵体表达 ...

右边最后一个是未诱导的对照。啥也没加过,就在4度冰箱放着来着。但是,没有做空载体对照。

发自小木虫IOS客户端
7楼2017-03-27 10:22:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinnini125

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by jinnini125 at 2017-03-27 10:22:58
右边最后一个是未诱导的对照。啥也没加过,就在4度冰箱放着来着。但是,没有做空载体对照。
...

你好,我再问一下,由于是第一次做。裂解一下跑上清液和沉淀,那个裂解怎么做?

发自小木虫IOS客户端
8楼2017-03-27 10:23:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinnini125

木虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by 781055707 at 2017-03-27 11:24:32
楼主阴性那,第一次做的蛋白都要跑阴性的,也可能全都不是呀。

好的,谢谢楼主

发自小木虫IOS客户端
10楼2017-03-27 11:55:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 jinnini125 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 300求调剂,材料科学英一数二 +16 leaflight 2026-03-24 16/800 2026-03-30 13:00 by 1939136013狗壮
[论文投稿] arxiv背书人邮件求助 20+3 redcom 2026-03-25 7/350 2026-03-30 10:56 by bobvan
[考研] 318求调剂 +7 陈晨79 2026-03-30 7/350 2026-03-30 10:49 by 探123
[考研] 一志愿中南大学化学0703总分337求调剂 +6 niko- 2026-03-27 6/300 2026-03-30 10:25 by herarysara
[考研] 318一志愿吉林大学生物与医药 求调剂 +5 笃行致远. 2026-03-28 5/250 2026-03-30 06:56 by ilovexiaobin
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研经历 +8 cccchenso 2026-03-29 8/400 2026-03-29 23:53 by 我是小康
[考研] 化学0703 调剂 306分 一志愿211 +7 26要上岸 2026-03-28 7/350 2026-03-29 20:04 by 无际的草原
[考研] 070305高分子化学与物理 304分求调剂 +12 c297914 2026-03-28 12/600 2026-03-29 16:21 by Serene1974
[考研] 0856求调剂 +13 zhn03 2026-03-25 14/700 2026-03-29 08:13 by fmesaito
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +8 谷雨上岸 2026-03-23 9/450 2026-03-29 01:00 by 我是小康
[考研] 一志愿华理,数一英一285求A区调剂 +8 AZMK 2026-03-25 12/600 2026-03-28 18:15 by AZMK
[考研] 一志愿华北电力大学能动专硕,293,求调剂 +3 15537177284 2026-03-23 5/250 2026-03-28 16:11 by xxxsssccc
[考研] 求调剂 +6 芦lty 2026-03-25 7/350 2026-03-28 13:13 by 唐沐儿
[考研] 279 分 求调剂 +4 睡个好觉_16 2026-03-24 4/200 2026-03-27 15:05 by 醉在风里
[考研] 305求调剂 +5 哇卢卡库 2026-03-26 5/250 2026-03-27 14:01 by laoshidan
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[考研] 300分,材料,求调剂,英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
信息提示
请填处理意见