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jinnini125木虫 (小有名气)
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[求助]
关于原核表达诱导条件已有3人参与
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本人用的是全式金的原核表达载体，根据说明书37度诱导，设置时间梯度3.4.5三个梯度，IPTG浓度设置0.6 0.8 1.0三个梯度。未诱导的作为对照跑SDS-PAGE胶，结果如图。目的条带大约26KD，MARKER指示带倒数第一是20KD左右，第二是29KD左右。 发自小木虫IOS客户端 |
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:16:03
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裂解不就是破碎细胞，用超声波细胞破碎仪。然后看看破碎后菌液有没有澄清，基本上澄清了就很少是包涵体，然后离心。取沉淀和上清，上清去纯化就好了。再跑胶看看有没有 发自小木虫IOS客户端 |
12楼2017-03-27 12:24:44
fengshen2005
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jinnini1252楼2017-03-23 22:33:54
fengshen2005
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3楼2017-03-23 22:34:53
xinxiyuzhou
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:15:38
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:15:38
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应该是表达了，你收集菌体，裂解一下，分别跑一个裂解液上清和沉淀看是包涵体还是可溶性表达，一般情况下不用摸时间和IPTG浓度和温度梯度，37℃，4到6小时，iptg1mm就可以，做多了只是增加工作量，如果是包涵体表达，就需要考虑前面的因素了，你跑的这个胶没有太大意义，连未诱导的对照也没有，所以没法给你建议，做实验一定要设置阴性对照 发自小木虫Android客户端 |
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4楼2017-03-23 23:17:24