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jinnini125木虫 (小有名气)
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关于原核表达诱导条件 已有3人参与
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本人用的是全式金的原核表达载体,根据说明书37度诱导,设置时间梯度3.4.5三个梯度,IPTG浓度设置0.6 0.8 1.0三个梯度。未诱导的作为对照跑SDS-PAGE胶,结果如图。目的条带大约26KD,MARKER指示带倒数第一是20KD左右,第二是29KD左右。 发自小木虫IOS客户端 |
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xinxiyuzhou
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:15:38
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应该是表达了,你收集菌体,裂解一下,分别跑一个裂解液上清和沉淀看是包涵体还是可溶性表达,一般情况下不用摸时间和IPTG浓度和温度梯度,37℃,4到6小时,iptg1mm就可以,做多了只是增加工作量,如果是包涵体表达,就需要考虑前面的因素了,你跑的这个胶没有太大意义,连未诱导的对照也没有,所以没法给你建议,做实验一定要设置阴性对照 发自小木虫Android客户端 |
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4楼2017-03-23 23:17:24

9楼2017-03-27 11:24:32
【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:16:03
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裂解不就是破碎细胞,用超声波细胞破碎仪。然后看看破碎后菌液有没有澄清,基本上澄清了就很少是包涵体,然后离心。取沉淀和上清,上清去纯化就好了。再跑胶看看有没有 发自小木虫IOS客户端 |
12楼2017-03-27 12:24:44
fengshen2005
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2楼2017-03-23 22:33:54
fengshen2005
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3楼2017-03-23 22:34:53
jinnini125
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jinnini125
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jinnini125
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8楼2017-03-27 10:23:55
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