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jinnini125

木虫 (小有名气)

[求助] 关于原核表达诱导条件 已有3人参与

本人用的是全式金的原核表达载体,根据说明书37度诱导,设置时间梯度3.4.5三个梯度,IPTG浓度设置0.6 0.8 1.0三个梯度。未诱导的作为对照跑SDS-PAGE胶,结果如图。目的条带大约26KD,MARKER指示带倒数第一是20KD左右,第二是29KD左右。

关于原核表达诱导条件


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jinnini125

木虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by jinnini125 at 2017-03-27 10:22:58
右边最后一个是未诱导的对照。啥也没加过,就在4度冰箱放着来着。但是,没有做空载体对照。
...

你好,我再问一下,由于是第一次做。裂解一下跑上清液和沉淀,那个裂解怎么做?

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8楼2017-03-27 10:23:55
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查看全部 16 个回答

fengshen2005

银虫 (正式写手)

从左到右都是什么?

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-03-23 22:33:54
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fengshen2005

银虫 (正式写手)

诱导温度只有37度?可以16度,28度啊

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2017-03-23 22:34:53
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:15:38
应该是表达了,你收集菌体,裂解一下,分别跑一个裂解液上清和沉淀看是包涵体还是可溶性表达,一般情况下不用摸时间和IPTG浓度和温度梯度,37℃,4到6小时,iptg1mm就可以,做多了只是增加工作量,如果是包涵体表达,就需要考虑前面的因素了,你跑的这个胶没有太大意义,连未诱导的对照也没有,所以没法给你建议,做实验一定要设置阴性对照

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4楼2017-03-23 23:17:24
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