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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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jinnini125

木虫 (小有名气)

[求助] 关于原核表达诱导条件 已有3人参与

本人用的是全式金的原核表达载体，根据说明书37度诱导，设置时间梯度3.4.5三个梯度，IPTG浓度设置0.6 0.8 1.0三个梯度。未诱导的作为对照跑SDS-PAGE胶，结果如图。目的条带大约26KD，MARKER指示带倒数第一是20KD左右，第二是29KD左右。

关于原核表达诱导条件


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1楼 2017-03-23 19:38:17
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:15:38
应该是表达了，你收集菌体，裂解一下，分别跑一个裂解液上清和沉淀看是包涵体还是可溶性表达，一般情况下不用摸时间和IPTG浓度和温度梯度，37℃，4到6小时，iptg1mm就可以，做多了只是增加工作量，如果是包涵体表达，就需要考虑前面的因素了，你跑的这个胶没有太大意义，连未诱导的对照也没有，所以没法给你建议，做实验一定要设置阴性对照

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jinnini125
4楼2017-03-23 23:17:24
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

楼主阴性那，第一次做的蛋白都要跑阴性的，也可能全都不是呀。
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采菊东篱下，悠然见南山。
9楼2017-03-27 11:24:32
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I苧檬

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:16:03
引用回帖:
8楼: Originally posted by jinnini125 at 2017-03-27 10:23:55
你好，我再问一下，由于是第一次做。裂解一下跑上清液和沉淀，那个裂解怎么做？
...

裂解不就是破碎细胞，用超声波细胞破碎仪。然后看看破碎后菌液有没有澄清，基本上澄清了就很少是包涵体，然后离心。取沉淀和上清，上清去纯化就好了。再跑胶看看有没有

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12楼2017-03-27 12:24:44
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普通回帖

fengshen2005

银虫 (正式写手)
从左到右都是什么？

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jinnini125
2楼2017-03-23 22:33:54
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fengshen2005

银虫 (正式写手)
诱导温度只有37度？可以16度，28度啊

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jinnini125
3楼2017-03-23 22:34:53
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jinnini125

木虫 (小有名气)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by fengshen2005 at 2017-03-23 22:33:54
从左到右都是什么？

从左到右是0.6mM，0.8，1.0 IPTG，37度3小时。37度4小时。37度5小时。最后第十个是未诱导。

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5楼2017-03-27 10:20:06
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jinnini125

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by fengshen2005 at 2017-03-23 22:34:53
诱导温度只有37度？可以16度，28度啊

好的，谢谢。我正在设置温度梯度。以0.6的IPTG，4小时。设置16 28 37对照。

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6楼2017-03-27 10:21:20
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jinnini125

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-23 23:17:24
应该是表达了，你收集菌体，裂解一下，分别跑一个裂解液上清和沉淀看是包涵体还是可溶性表达，一般情况下不用摸时间和IPTG浓度和温度梯度，37℃，4到6小时，iptg1mm就可以，做多了只是增加工作量，如果是包涵体表达 ...

右边最后一个是未诱导的对照。啥也没加过，就在4度冰箱放着来着。但是，没有做空载体对照。

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7楼2017-03-27 10:22:58
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jinnini125

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by jinnini125 at 2017-03-27 10:22:58
右边最后一个是未诱导的对照。啥也没加过，就在4度冰箱放着来着。但是，没有做空载体对照。
...

你好，我再问一下，由于是第一次做。裂解一下跑上清液和沉淀，那个裂解怎么做？

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8楼2017-03-27 10:23:55
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jinnini125

木虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 781055707 at 2017-03-27 11:24:32
楼主阴性那，第一次做的蛋白都要跑阴性的，也可能全都不是呀。

好的，谢谢楼主

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10楼2017-03-27 11:55:32
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