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jinnini125

木虫 (小有名气)

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9楼: Originally posted by 781055707 at 2017-03-27 11:24:32
楼主阴性那,第一次做的蛋白都要跑阴性的,也可能全都不是呀。

谢谢提醒

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11楼2017-03-27 11:55:56
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I苧檬

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:16:03
引用回帖:
8楼: Originally posted by jinnini125 at 2017-03-27 10:23:55
你好,我再问一下,由于是第一次做。裂解一下跑上清液和沉淀,那个裂解怎么做?
...

裂解不就是破碎细胞,用超声波细胞破碎仪。然后看看破碎后菌液有没有澄清,基本上澄清了就很少是包涵体,然后离心。取沉淀和上清,上清去纯化就好了。再跑胶看看有没有

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12楼2017-03-27 12:24:44
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jinnini125

木虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by I苧檬 at 2017-03-27 12:24:44
裂解不就是破碎细胞,用超声波细胞破碎仪。然后看看破碎后菌液有没有澄清,基本上澄清了就很少是包涵体,然后离心。取沉淀和上清,上清去纯化就好了。再跑胶看看有没有
...

哦哦,我现在做的是煮沸离心取上清跑胶。和超声波破碎不是同一个哈?没人做过,自己在摸索……很多都不懂

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13楼2017-03-27 12:29:20
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pjxiongjing

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-23 23:17:24
应该是表达了,你收集菌体,裂解一下,分别跑一个裂解液上清和沉淀看是包涵体还是可溶性表达,一般情况下不用摸时间和IPTG浓度和温度梯度,37℃,4到6小时,iptg1mm就可以,做多了只是增加工作量,如果是包涵体表达 ...

请问低温诱导,蛋白更容易在上清中表达么?

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14楼2017-05-09 21:37:57
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

15楼2017-05-10 07:45:39
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微雪奏

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by jinnini125 at 2017-03-27 10:22:58
右边最后一个是未诱导的对照。啥也没加过,就在4度冰箱放着来着。但是,没有做空载体对照。
...

空载体指?

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16楼2017-11-20 14:58:51
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