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jinnini125

木虫 (小有名气)

[求助] 关于原核表达诱导条件 已有3人参与

本人用的是全式金的原核表达载体,根据说明书37度诱导,设置时间梯度3.4.5三个梯度,IPTG浓度设置0.6 0.8 1.0三个梯度。未诱导的作为对照跑SDS-PAGE胶,结果如图。目的条带大约26KD,MARKER指示带倒数第一是20KD左右,第二是29KD左右。

关于原核表达诱导条件


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pjxiongjing

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by xinxiyuzhou at 2017-03-23 23:17:24
应该是表达了,你收集菌体,裂解一下,分别跑一个裂解液上清和沉淀看是包涵体还是可溶性表达,一般情况下不用摸时间和IPTG浓度和温度梯度,37℃,4到6小时,iptg1mm就可以,做多了只是增加工作量,如果是包涵体表达 ...

请问低温诱导,蛋白更容易在上清中表达么?

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14楼2017-05-09 21:37:57
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fengshen2005

银虫 (正式写手)

从左到右都是什么?

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2楼2017-03-23 22:33:54
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fengshen2005

银虫 (正式写手)

诱导温度只有37度?可以16度,28度啊

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3楼2017-03-23 22:34:53
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xinxiyuzhou

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-05-09 22:15:38
应该是表达了,你收集菌体,裂解一下,分别跑一个裂解液上清和沉淀看是包涵体还是可溶性表达,一般情况下不用摸时间和IPTG浓度和温度梯度,37℃,4到6小时,iptg1mm就可以,做多了只是增加工作量,如果是包涵体表达,就需要考虑前面的因素了,你跑的这个胶没有太大意义,连未诱导的对照也没有,所以没法给你建议,做实验一定要设置阴性对照

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4楼2017-03-23 23:17:24
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