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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 毕赤酵母表达甲醇诱导
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amberhwk

新虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母表达甲醇诱导 已有2人参与

阳性克隆子在BMGY培养基中扩菌18小时到OD值2到6，然后离心去上清，沉淀菌体重悬到BMGY中培养每隔24小时加甲醇，想问一下是从重悬的时候开始加还是重悬24小时后加甲醇

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1楼 2017-03-02 20:24:27
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

在你换到BMMY培养基里面就要加甲醇了，也就是是离心去上清后重悬时就需要加入甲醇，因为你离心把含有碳源甘油的上清去掉了。
重悬后每24小时再加一次甲醇。
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amberhwk
2楼2017-03-13 10:49:54
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曾小旭

新虫 (初入文坛)
但是用的BMMY来重悬，培养基本身就含有终浓度为0.5%的甲醇了，所以，我觉得应该是诱导24h之后再加，重悬时不需要加。

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3楼2017-04-11 21:54:50
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amberhwk

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by kaoyanjiu at 2017-03-13 10:49:54
在你换到BMMY培养基里面就要加甲醇了，也就是是离心去上清后重悬时就需要加入甲醇，因为你离心把含有碳源甘油的上清去掉了。
重悬后每24小时再加一次甲醇。

不是BMMY 是BMGY

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4楼2017-04-11 21:59:28
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by amberhwk at 2017-04-11 21:59:28
不是BMMY 是BMGY
...

诱导表达蛋白应该用含有甲醇的 BMMY培养基，先用bmgy培养18h换培养基bmmy！

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5楼2017-04-11 22:27:25
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kaoyanjiu

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by amberhwk at 2017-04-11 21:59:28
不是BMMY 是BMGY
...

对的。我的意思就是BMMY培养基里面就有甲醇了。因为我的酵母培养基都按YNB,蛋白胨，酵母粉配，没有BMGY和BMMY的差别，所以重悬的时候加入甲醇。
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6楼2017-04-28 10:27:19
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