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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酵母质粒线性化问题
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amberhwk

新虫 (小有名气)

[交流] 酵母质粒线性化问题

我用的是pPICZaA 质粒，目的片段900左右，重组以后用Sac I 线性化处理，电泳没有条带，这是哪里出了问题，一头雾水，而且重组质粒pcr 转化后的菌落pcr都是没问题

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1楼 2016-12-28 09:33:38
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amberhwk

新虫 (小有名气)
求助

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2楼2016-12-28 13:42:47
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yangxp2006

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
菌落PCR假阳性很高，你构建的很可能是空载体
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3楼2016-12-28 20:49:50
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mlbiosci

新虫 (正式写手)
你的电泳没条带

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4楼2016-12-28 23:01:31
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mlbiosci

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mlbiosci at 2016-12-28 23:01:31
你的电泳没条带

具体说一下

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5楼2016-12-28 23:01:48
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amberhwk

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by mlbiosci at 2016-12-28 23:01:48
具体说一下
...

质粒的条带有，但是线性化后没有条带，哪个位置都没有

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6楼2016-12-29 09:46:23
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amberhwk

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yangxp2006 at 2016-12-28 20:49:50
菌落PCR假阳性很高，你构建的很可能是空载体

所以是不是应该先测序看一下

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7楼2016-12-29 09:46:56
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mlbiosci

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你指的是转化酵母后的，pcr没条带？有无阳性对照？能否确定酵母转化成功？

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8楼2016-12-29 12:49:50
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amberhwk

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by mlbiosci at 2016-12-29 12:49:50
你指的是转化酵母后的，pcr没条带？有无阳性对照？能否确定酵母转化成功？

转化以后，提质粒，pcr都有条带，但是线性化没有，重组质粒浓度700，条带否聚在了最前面
酵母质粒线性化问题



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9楼2016-12-29 13:00:17
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mlbiosci

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的意思是线性化后的载体为模板pcr没结果？

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amberhwk
10楼2016-12-29 13:04:53
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