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amberhwk

新虫 (小有名气)

[交流] 酵母质粒线性化问题

我用的是pPICZaA 质粒,目的片段900左右,重组以后用Sac I 线性化处理,电泳没有条带,这是哪里出了问题,一头雾水,而且重组质粒pcr 转化后的菌落pcr都是没问题

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amberhwk

新虫 (小有名气)

2楼2016-12-28 13:42:47
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yangxp2006

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
菌落PCR假阳性很高,你构建的很可能是空载体
3楼2016-12-28 20:49:50
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mlbiosci

新虫 (正式写手)

4楼2016-12-28 23:01:31
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mlbiosci

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by mlbiosci at 2016-12-28 23:01:31
你的电泳没条带

具体说一下

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5楼2016-12-28 23:01:48
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amberhwk

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by mlbiosci at 2016-12-28 23:01:48
具体说一下
...

质粒的条带有,但是线性化后没有条带,哪个位置都没有

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6楼2016-12-29 09:46:23
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amberhwk

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yangxp2006 at 2016-12-28 20:49:50
菌落PCR假阳性很高,你构建的很可能是空载体

所以是不是应该先测序看一下

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7楼2016-12-29 09:46:56
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mlbiosci

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你指的是转化酵母后的,pcr没条带?有无阳性对照?能否确定酵母转化成功?

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8楼2016-12-29 12:49:50
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amberhwk

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by mlbiosci at 2016-12-29 12:49:50
你指的是转化酵母后的,pcr没条带?有无阳性对照?能否确定酵母转化成功?

转化以后,提质粒,pcr都有条带,但是线性化没有,重组质粒浓度700,条带否聚在了最前面
酵母质粒线性化问题



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9楼2016-12-29 13:00:17
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mlbiosci

新虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
你的意思是线性化后的载体为模板pcr没结果?

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10楼2016-12-29 13:04:53
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