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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 新手定量pcr求助
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787719259

银虫 (小有名气)

[求助] 新手定量pcr求助 已有3人参与

最近在做定量pcr,对于提取到的RNA只有18s能继续后续实验吗？需要一个大神指导

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1楼 2016-12-07 21:37:44
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

niukuiju

铜虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-07 22:14:19
可以反转录后试试能不能扩出目的基因

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Nothingisimpossibletoawillingheart.
2楼2016-12-07 22:04:49
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sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-09 07:34:13
可以做下试试，如果反转录后能扩出目的基因就可以使用，我们以前提也遇到这种情况，没管它继续做还是有结果的。

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知识就像蒲公英的花儿一样，播种在世界的每一个角落。
6楼2016-12-08 08:34:57
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pandezhuo

银虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-12 07:35:18
引用回帖:
15楼: Originally posted by 787719259 at 2016-12-08 12:34:05
如果有盐离子和大分子残留会对后面的定量影响大吗
...

都会有影响的。我认为要保证RT—qPCR数据的可靠和稳定性，所提取的RNA质量要高。提取RNA 时严格注意预防RNase污染的事项，严格按照操作手册进行会提好的。

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16楼2016-12-08 15:03:54
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pandezhuo

银虫 (著名写手)
那你要比较下每次提取步骤。再次确认下提取环境是否干净，试剂有没有被污染等

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18楼2016-12-08 18:00:07
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allegory

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
20楼2016-12-08 22:21:14
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浮笙若梦

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-12 07:35:44
如果降解严重不能保证基因降解程度一致，所以最好别用。比如内参基因原本是10个拷贝，目的基因是5个，可能降解后，它不是断了嘛，能检测出来内参5个，目的基因还有4个，这样就不准了
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25楼2016-12-09 15:08:54
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普通回帖

pandezhuo

银虫 (著名写手)
不可以，18s明显说明你提的RNA降解了，不能继续做定量了

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787719259
3楼2016-12-07 23:34:51
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787719259

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by pandezhuo at 2016-12-07 23:34:51
不可以，18s明显说明你提的RNA降解了，不能继续做定量了

谢谢你的回复，那要进行后面的实验对RNA的要求是必须是28s,18s,5s都要有吗？

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4楼2016-12-08 00:38:49
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nuktyym81
祝福
5楼2016-12-08 01:56:37
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781055707

木虫 (著名写手)
做下试试吧。
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采菊东篱下，悠然见南山。
7楼2016-12-08 08:38:42
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787719259

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-08 08:34:57
可以做下试试，如果反转录后能扩出目的基因就可以使用，我们以前提也遇到这种情况，没管它继续做还是有结果的。

好的，谢谢

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8楼2016-12-08 09:29:20
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787719259

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 781055707 at 2016-12-08 08:38:42
做下试试吧。

好，我试试

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9楼2016-12-08 09:29:40
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787719259

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by niukuiju at 2016-12-07 22:04:49
可以反转录后试试能不能扩出目的基因

谢谢，我试下

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10楼2016-12-08 09:30:14
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