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787719259

银虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by nuktyym81 at 2016-12-08 01:56:37
祝福

谢谢

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11楼2016-12-08 09:30:41
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pandezhuo

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-12 07:36:18
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4楼: Originally posted by 787719259 at 2016-12-08 00:38:49
谢谢你的回复，那要进行后面的实验对RNA的要求是必须是28s,18s,5s都要有吗？
...

RNA的检测中条带28S的亮度大约是18S的两倍。你还需测定RNA的OD值，OD260/280=1.9~2.1,OD230/260大约2.0

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12楼2016-12-08 09:53:52
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pandezhuo

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
12楼: Originally posted by pandezhuo at 2016-12-08 09:53:52
RNA的检测中条带28S的亮度大约是18S的两倍。你还需测定RNA的OD值，OD260/280=1.9~2.1,OD230/260大约2.0
...

是OD260/230=2.0，小于2.0说明有盐离子和大分子的残留

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13楼2016-12-08 09:58:47
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787719259

银虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by pandezhuo at 2016-12-08 09:53:52
RNA的检测中条带28S的亮度大约是18S的两倍。你还需测定RNA的OD值，OD260/280=1.9~2.1,OD230/260大约2.0
...

Ok,如果提到的RNA中有少许的蛋白以及其他的杂质污染也不能用，是吗

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14楼2016-12-08 12:32:28
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787719259

银虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by pandezhuo at 2016-12-08 09:58:47
是OD260/230=2.0，小于2.0说明有盐离子和大分子的残留
...

如果有盐离子和大分子残留会对后面的定量影响大吗

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15楼2016-12-08 12:34:05
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pandezhuo

银虫 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-12 07:35:18
引用回帖:
15楼: Originally posted by 787719259 at 2016-12-08 12:34:05
如果有盐离子和大分子残留会对后面的定量影响大吗
...

都会有影响的。我认为要保证RT—qPCR数据的可靠和稳定性，所提取的RNA质量要高。提取RNA 时严格注意预防RNase污染的事项，严格按照操作手册进行会提好的。

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16楼2016-12-08 15:03:54
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787719259

银虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by pandezhuo at 2016-12-08 15:03:54
都会有影响的。我认为要保证RT—qPCR数据的可靠和稳定性，所提取的RNA质量要高。提取RNA 时严格注意预防RNase污染的事项，严格按照操作手册进行会提好的。
...

我第一次提到的RNA比较好，电泳条带，测定的OD比值都挺好，现在就越提越提不好了

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17楼2016-12-08 15:36:14
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pandezhuo

银虫 (著名写手)
那你要比较下每次提取步骤。再次确认下提取环境是否干净，试剂有没有被污染等

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18楼2016-12-08 18:00:07
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787719259

银虫 (小有名气)
引用回帖:
18楼: Originally posted by pandezhuo at 2016-12-08 18:00:07
那你要比较下每次提取步骤。再次确认下提取环境是否干净，试剂有没有被污染等

好的，能留个联系方式吗，以后肯定还会有各种问题的

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19楼2016-12-08 20:13:33
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allegory

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
20楼2016-12-08 22:21:14
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