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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 连接转化不长菌
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布丁褚仔

新虫 (初入文坛)

[求助] 连接转化不长菌 已有2人参与

载体5kb，基因1.5kb，酶切后有单条对应条带，但是颜色较浅，转化后实验组和对照组都不长菌，想问下是什么原因
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1楼 2016-11-28 10:30:15
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Murphe

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-01 06:00:23
xn8008: 应助指数+1 2016-12-01 06:00:32
1.感受态需要用刚刚冻融的较好 2.转化的时候应该严格控制各个过程的时间   3.感受态细胞比较脆弱，操作的时候应该轻柔，不可用枪猛吹吸 4.复苏时摇菌用180转，不可太快   5.涂布棒在酒精灯火焰上烧过后应该冷却后再涂菌，防止菌被烫死

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7楼2016-11-30 23:30:39
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普通回帖

rhapsody007
666

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
2楼2016-11-28 10:31:12
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Eccentric-

金虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-01 05:59:52
用的什么方法？我现在也是这个情况

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3楼2016-11-28 16:27:04
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-01 05:59:58
xn8008: 应助指数+1 2016-12-01 06:00:04
应该是没连上，重新做吧

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···
4楼2016-11-28 18:28:18
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liling0601

铜虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-01 06:00:09
没连上或者感受态不行，你可以详细说一下实验条件，否则别人也不好判断

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5楼2016-11-28 18:40:33
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贵阳小夏

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-12-01 06:00:18
很可能是感受态活性低，我之前遇到过。

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6楼2016-11-28 20:49:29
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dhmdddd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

实验组是什么？对照组是什么？如果对照组是质粒也没有长的话，那应该就是感受态细胞的问题。一般来讲酶切足够彻底，感受态可以，酶连的插入片段和载体的摩尔比例合适的话，转化不会有问题。
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上班族，学习ing……
8楼2016-12-01 10:30:25
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mailmrcai

铜虫 (正式写手)
转化后LB孵育久一点

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Comeon！
9楼2016-12-01 14:53:56
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布丁褚仔

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Eccentric- at 2016-11-28 16:27:04
用的什么方法？我现在也是这个情况

我换了种方法，依旧没长

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10楼2016-12-06 15:51:44
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