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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 目的片段不见了
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belinda_jun

新虫 (初入文坛)

[求助] 目的片段不见了 已有2人参与

第一张图左边是用目的基因的引物菌液pcr，右边是提的质粒，第二张图是双酶切的条带，目的条带不见了，这是什么情况啊，求大神解

目的片段不见了


目的片段不见了-1


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1楼 2016-10-14 16:14:00
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惰惰228

银虫 (小有名气)
双酶切后的目的条带多大？如果比较小，酶切时质粒用量太低的话，可能就看不到。如果目的片段小于1000bp，建议酶切时质粒需要1ug。
好运！
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原来你也在这里
2楼2016-10-17 06:37:15
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bio转录组

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能酶切引物不特意，在载体上也有这个引物，你查一下。按理说不会不见的，或者没连上
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生活活生生累死
3楼2016-10-17 07:50:10
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781055707

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没切开，你的载体RNA污染严重，先做一次质粒的纯化或胶回收吧（用胶回收获得的质粒好些），回收后在酶切。
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采菊东篱下，悠然见南山。
4楼2016-10-17 08:41:29
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弑者星魂

金虫 (正式写手)
菌落PCR的假阳性比较多，我们一直以酶切结果为准

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5楼2016-10-17 10:22:47
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Inmybloom

铜虫 (小有名气)
重复一下酶切吧，感觉引物二聚体也比较严重，blast一下引物看一看

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哈哈哈哈
6楼2016-10-17 14:24:05
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