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hybo0227

新虫 (初入文坛)

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专业: 植物生理与生化

[求助] 关于酵母双杂交的bait载体的构建已有1人参与

最近在做酵母双杂交的构建
但是目的片段 PCR老是P不亮不够回收使用淡到几乎看不见
已经试过不同浓度的模板和不同的温度都还是很淡
模板DNA用其他引物PCR很正常
现在有2个问题
1.是否还有其他可以改善的PCR条件
2.如果重新设计引物，是否可以在不动目的序列只能加酶切位点的情况下把间隔序列也加进去以此来寻找更合适的引物？

在此先谢谢了

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1楼 2013-06-12 15:24:20

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qinyy

新虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

1、PCR条件可以改善：用保真性好的酶，Tm值比引物Tm高几度，循环数多一点，体系扩大点。
2、既然可以扩增出来，引物就可以不用换。把循环数和体系都扩大点

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