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hybo0227

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于酵母双杂交的bait载体的构建已有1人参与

最近在做酵母双杂交的构建
但是目的片段 PCR老是P不亮  不够回收使用 淡到几乎看不见
已经试过 不同浓度的模板 和不同的温度 都还是很淡
模板DNA用其他 引物PCR很正常
现在有2个问题
1.是否还有其他可以改善的PCR条件
2.如果重新设计引物,是否可以在不动目的序列  只能加酶切位点的情况下 把间隔序列也加进去  以此来寻找更合适的引物?

在此先谢谢了
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qinyy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1、PCR条件可以改善:用保真性好的酶,Tm值比引物Tm高几度,循环数多一点,体系扩大点。
2、既然 可以扩增出来,引物就可以不用换。把循环数 和 体系都扩大点
2楼2014-07-02 18:47:08
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