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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 连接的一个问题
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清风寨

银虫 (小有名气)

[求助] 连接的一个问题

各位高手 小弟最近在做连接 但是我的目的基因片段是平末端 载体也是平末端 ，这样连接正确的概率很低 ，由于目的片段是从别的基因上切下的A3-GFP 所以我没有其两端引物 无法做菌落PCR鉴定阳性克隆，我所想到的只有摇菌抽质粒鉴定，可是连着几天都摇了三四十管菌了 就是不见正确克隆。真是抓破头皮啊 ！！ 希望各位高手可以指点迷津 帮助小弟 感激不尽！！！！
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冷风过心变热
1楼 2011-09-06 08:37:44
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hf2016

金虫 (正式写手)
欢迎多交流
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一切开始于结束之后
2楼2011-09-06 08:39:11
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根

【答案】应助回帖

清风寨(金币+1): 谢谢 给俺金币 对新手真是帮助很大 谢谢 2011-09-06 09:11:11
我以前这样搞过，你可以参考:以前我将平末端的目的片段连到T载体上时，在目的片段上用普通聚合酶加ATP后在72度半小时在其尾巴上加A，后过柱子，在连就成功了。楼主可以参考，再想想办法。
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真相是最大的奢侈品
3楼2011-09-06 09:01:44
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清风寨

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-06 09:01:44:
我以前这样搞过，你可以参考:以前我将平末端的目的片段连到T载体上时，在目的片段上用普通聚合酶加ATP后在72度半小时在其尾巴上加A，后过柱子，在连就成功了。楼主可以参考，再想想办法。

此法甚妙 多谢指教 我去试试
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冷风过心变热
4楼2011-09-06 09:08:14
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ytetyio09

新虫 (正式写手)
可以试试这篇论文的方法，虽然是个小的改进，但是值得一试，而且很方便：
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24613256
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5楼2014-03-25 10:01:08
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