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清风寨

银虫 (小有名气)

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专业: 细胞生物学研究中的新方法

[求助] 连接的一个问题

各位高手小弟最近在做连接但是我的目的基因片段是平末端载体也是平末端，这样连接正确的概率很低，由于目的片段是从别的基因上切下的A3-GFP 所以我没有其两端引物无法做菌落PCR鉴定阳性克隆，我所想到的只有摇菌抽质粒鉴定，可是连着几天都摇了三四十管菌了就是不见正确克隆。真是抓破头皮啊！！希望各位高手可以指点迷津帮助小弟感激不尽！！！！

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冷风过心变热

1楼 2011-09-06 08:37:44

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清风寨

银虫 (小有名气)

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引用回帖:

3楼: Originally posted by wanhscn at 2011-09-06 09:01:44:
我以前这样搞过，你可以参考:以前我将平末端的目的片段连到T载体上时，在目的片段上用普通聚合酶加ATP后在72度半小时在其尾巴上加A，后过柱子，在连就成功了。楼主可以参考，再想想办法。

此法甚妙多谢指教我去试试