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转化大肠杆菌没有菌落
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wzm小情绪
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转化大肠杆菌没有菌落
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回收race产物加A连T,转化到大肠杆菌,一直没有菌落,过程为,把大肠杆菌在冰上融化,5ul载体产物加到20ul大肠杆菌里面,冰上30分钟,42度热激60s,冰上4分种,放置在摇床上复苏1h.转速为180r/h,图板在含有Amp固体培养基上,37 恒温培养16h,一直没有菌落,哪里做错了啊,,求助求助,
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1楼
2016-09-26 07:35:56
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2016-09-27 20:43:41
改用用电转仪做吧
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2楼
2016-09-26 08:02:11
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2016-09-27 20:43:21
没长出来菌落的情况首先考虑的是感受态的问题,做实验时最后做个阳性实验,比如拿个以连好的T载也转化下感受态(量很少,用个0.2W微升就行),别偷懒,转化T载不需要电转,完全没必要,钙转化就行了,操作步骤肯定不会出现问题的。
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4楼
2016-09-26 14:00:59
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2楼
:
Originally posted by
wsn2008
at 2016-09-26 08:02:11
改用用电转仪做吧
一直用的是这个,以前成功,最近一直不成器
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3楼
2016-09-26 11:00:31
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2016-09-26 18:17:09
楼主是自己做的感受态,还是买的?如果是买的空连的t载也会长几个克隆啊!
还有,楼主看看amp 的板子有没有问题;
如果觉得转化效率低的话,可以在涂板子的时候,将活化的菌液离心后再全部涂了。
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做一件事情,没有值不值得,只是想不想。
5楼
2016-09-26 17:12:52
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2016-09-27 20:44:02
我们做转化的时候热击是严格的30s,没试过60s,你可以试下,希望对你有帮助哈。
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坚持到底就是胜利!
6楼
2016-09-26 18:18:05
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6楼
:
Originally posted by
kuaile5420
at 2016-09-26 18:18:05
我们做转化的时候热击是严格的30s,没试过60s,你可以试下,希望对你有帮助哈。
我们热激都是90s的
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tobeyourself——Tomas
7楼
2016-09-26 18:43:59
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我们的步骤不一样
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8楼
2016-09-26 18:55:09
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7楼
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Tomas-Bin
at 2016-09-26 18:43:59
我们热激都是90s的...
嗯嗯,那就应该不是这个问题了
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9楼
2016-09-26 18:56:06
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4楼
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Originally posted by
llsllslls92
at 2016-09-26 14:00:59
没长出来菌落的情况首先考虑的是感受态的问题,做实验时最后做个阳性实验,比如拿个以连好的T载也转化下感受态(量很少,用个0.2W微升就行),别偷懒,转化T载不需要电转,完全没必要,钙转化就行了,操作步骤肯定不 ...
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10楼
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