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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 转化大肠杆菌没有菌落
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wzm小情绪

新虫 (正式写手)

[求助] 转化大肠杆菌没有菌落 已有7人参与

回收race产物加A连T,转化到大肠杆菌，一直没有菌落，过程为，把大肠杆菌在冰上融化，5ul载体产物加到20ul大肠杆菌里面，冰上30分钟，42度热激60s,冰上4分种，放置在摇床上复苏1h.转速为180r/h,图板在含有Amp固体培养基上，37 恒温培养16h,一直没有菌落，哪里做错了啊，，求助求助，

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1楼 2016-09-26 07:35:56
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

wsn2008

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-27 20:43:41
改用用电转仪做吧

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2楼2016-09-26 08:02:11
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llsllslls92

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-26 18:16:52
xn8008: 应助指数+1 2016-09-27 20:43:21
没长出来菌落的情况首先考虑的是感受态的问题，做实验时最后做个阳性实验，比如拿个以连好的T载也转化下感受态（量很少，用个0.2W微升就行），别偷懒，转化T载不需要电转，完全没必要，钙转化就行了，操作步骤肯定不会出现问题的。
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4楼2016-09-26 14:00:59
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普通回帖

wzm小情绪

新虫 (正式写手)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-27 20:43:47
引用回帖:
2楼: Originally posted by wsn2008 at 2016-09-26 08:02:11
改用用电转仪做吧

一直用的是这个，以前成功，最近一直不成器

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3楼2016-09-26 11:00:31
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我花了18年

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-26 18:17:09
楼主是自己做的感受态，还是买的？如果是买的空连的t载也会长几个克隆啊！
还有，楼主看看amp 的板子有没有问题；
如果觉得转化效率低的话，可以在涂板子的时候，将活化的菌液离心后再全部涂了。
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做一件事情，没有值不值得，只是想不想。
5楼2016-09-26 17:12:52
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kuaile5420

专家顾问 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-27 20:44:02
我们做转化的时候热击是严格的30s，没试过60s，你可以试下，希望对你有帮助哈。
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坚持到底就是胜利！
6楼2016-09-26 18:18:05
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Tomas-Bin

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-27 20:44:07
xn8008: 金币+1 2016-09-27 20:44:23
引用回帖:
6楼: Originally posted by kuaile5420 at 2016-09-26 18:18:05
我们做转化的时候热击是严格的30s，没试过60s，你可以试下，希望对你有帮助哈。

我们热激都是90s的
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tobeyourself——Tomas
7楼2016-09-26 18:43:59
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牛丽1

新虫 (著名写手)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-27 20:44:13
我们的步骤不一样

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8楼2016-09-26 18:55:09
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kuaile5420

专家顾问 (著名写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-09-27 20:44:18
引用回帖:
7楼: Originally posted by Tomas-Bin at 2016-09-26 18:43:59
我们热激都是90s的...

嗯嗯，那就应该不是这个问题了
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坚持到底就是胜利！
9楼2016-09-26 18:56:06
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wzm小情绪

新虫 (正式写手)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-09-27 20:44:30
引用回帖:
4楼: Originally posted by llsllslls92 at 2016-09-26 14:00:59
没长出来菌落的情况首先考虑的是感受态的问题，做实验时最后做个阳性实验，比如拿个以连好的T载也转化下感受态（量很少，用个0.2W微升就行），别偷懒，转化T载不需要电转，完全没必要，钙转化就行了，操作步骤肯定不 ...

嗯好的

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10楼2016-09-26 19:17:55
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