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971731043

新虫 (职业作家)

[求助] cDNA扩增出来非常暗,怎么办啊? 已有3人参与

cDNA扩增出来非常暗,怎么办啊?

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星心的回忆

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

反转录出来的cDNA有验证过吗?如果验证过没问题,在考虑增加模板量,降低引物的退火温度试试。有时候引物的退火温度不合适,跑出来的条带就会很暗
8楼2016-05-27 13:23:55
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普通回帖

醉_梦

新虫 (初入文坛)

加大体系;加大模板;加大引物;增加循环数;降低退火。都可以。

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2楼2016-05-23 10:59:48
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971731043

新虫 (职业作家)

酶换了,加大了模板量,35个循环,还是不行

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3楼2016-05-23 11:31:42
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雨儿天0320

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 971731043 at 2016-05-23 11:31:42
酶换了,加大了模板量,35个循环,还是不行

那会不会是你提的DNA质量不行呢?我做实验有时候提出来的很低,但是34X就很亮 了
4楼2016-05-23 13:54:39
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971731043

新虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 971731043 at 2016-05-23 11:31:42
酶换了,加大了模板量,35个循环,还是不行

用的是反转录出来的cDNA

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5楼2016-05-23 14:59:24
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Ivy尘

新虫 (正式写手)

有二聚体吗?考虑引物是否合适。

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6楼2016-05-24 14:47:54
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971731043

新虫 (职业作家)

7楼2016-05-24 15:51:39
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star013

新虫 (知名作家)


9楼2016-05-27 14:12:43
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wy604987664

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 星心的回忆 at 2016-05-27 13:23:55
反转录出来的cDNA有验证过吗?如果验证过没问题,在考虑增加模板量,降低引物的退火温度试试。有时候引物的退火温度不合适,跑出来的条带就会很暗

我之前有次也是一开始无条带,然后退火温度降低2度有条带但很暗,在降了2度正常了

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10楼2016-05-28 12:32:43
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