应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » qPCR阴性对照有扩增
31/1返回列表
查看: 4041  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qlj0125

铜虫 (初入文坛)

[交流] qPCR阴性对照有扩增

我是做miRNA检测的，之前一直没扩出来，现在有扩增而且曲线非常漂亮，关键就是阴性对照也有扩增。我用不同的cDNA浓度进行稀释，发现CT值是随着cDNA浓度降低而升高的，那应该就是引物污染的可能性很大。
    但是如果全部换引物的话成本问题蛮大，因为不仅仅是miRNA的引物，还包括内参以及第二链的引物都要换。我做的是相对定量，所以我是想知道，在保证扩增的产物是由cDNA模板而来的情况下，阴性对照有扩增影响计算吗？或者说这样的结果可不可以用？
    急 急 急！

[ Last edited by qlj0125 on 2012-3-13 at 16:06 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-03-13 16:04:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rb

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阴性扩增了，那么结果就不可靠了。建议还是换了吧，一个小包装的荧光探针加引物不到600，很便宜的。不用那么计较了。
赞一下 回复此楼
2楼2012-06-08 14:56:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

领航123456

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的阴性对照是指的反转录时的非模板对照吧，如果这个对照出现扩增起峰，Ct值和实验组相差<5的话，你的数据是不可靠的，这样的数据属于假阳性扩增，是由于miRNA定量引物引起的，因为反向引物用的是通用引物，只有正向是特异的，扩增产物的特异性是没有保证的，这也是国内miRNA定量试剂盒的缺陷所在，建议你用下双向也就是上下游都是特异性引物的试剂盒，可以解决假阳性扩增的问题。
赞一下 回复此楼
3楼2015-05-07 09:07:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qlj0125 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭