应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 质粒双酶切切不开
211/1返回列表
查看: 1898  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

836277455

新虫 (初入文坛)

[交流] 质粒双酶切切不开

pBARGPE1质粒（5518bp）双酶切总是切不开分别单酶切后发现其中一个酶把质粒线性化了，而另一个酶切过后电泳条带介于对照质粒与线性化质粒条带之间，这是什么问题呢求大神指点

质粒双酶切切不开


发自小木虫IOS客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2016-03-30 21:13:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

54如来哥哥

新虫 (正式写手)
★
836277455(金币+2): 谢谢参与
不懂啊

发自小木虫Android客户端
回复此楼
4楼2016-03-30 21:37:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

harry007

新虫 (小有名气)
★
836277455(金币+2): 谢谢参与
双酶切用的buffer对不对？确定好要不要加bsa跟dtt？
配的琼脂汤浓度是多少？要切下来的条带大小多大？条带小的话胶浓度低了不容易看清

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-03-30 22:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

粒粒分明

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是不是酶切位点有问题呢？检查一下

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
12楼2016-03-30 23:48:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

836277455

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by harry007 at 2016-03-30 22:03:47
双酶切用的buffer对不对？确定好要不要加bsa跟dtt？
配的琼脂汤浓度是多少？要切下来的条带大小多大？条带小的话胶浓度低了不容易看清

用的NEB的酶，Cutsmart是通用buffer

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
13楼2016-03-31 16:31:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

harry007

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
13楼: Originally posted by 836277455 at 2016-03-31 16:31:49
用的NEB的酶，Cutsmart是通用buffer
...

条带大小跟胶浓度呢？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
14楼2016-03-31 16:32:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

836277455

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 粒粒分明 at 2016-03-30 23:48:50
是不是酶切位点有问题呢？检查一下

似乎不是酶切位点的问题，宿主菌是XL-1，应该也没有甲基化修饰

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
15楼2016-03-31 16:34:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxkui_sina

金虫 (小有名气)
分开切不就得了

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
16楼2016-03-31 17:06:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

836277455

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
14楼: Originally posted by harry007 at 2016-03-31 16:32:52
条带大小跟胶浓度呢？
...

浓度百分之一，要切下来的条带两千左右

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
17楼2016-03-31 17:31:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

836277455

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by lxkui_sina at 2016-03-31 17:06:20
分开切不就得了

试过了，切不开......

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
18楼2016-03-31 17:32:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

solomon7811

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by harry007 at 2016-03-30 22:03:47
双酶切用的buffer对不对？确定好要不要加bsa跟dtt？
配的琼脂汤浓度是多少？要切下来的条带大小多大？条带小的话胶浓度低了不容易看清

对的，双酶切两个酶的buffer要最好一样，如不一样要看下在使用buffer中的效率。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
19楼2016-03-31 17:32:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

836277455

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by lxkui_sina at 2016-03-31 17:06:20
分开切不就得了

先一个酶切，纯化了再用另一个酶切

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
20楼2016-03-31 17:32:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rfywoaini

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
酶切的buffer是这个公司的么，不然就换其他公司的酶呗，比如说takara

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
21楼2016-03-31 22:14:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
54如来哥哥2楼
2016-03-30 21:37   回复  
836277455(金币+2): 谢谢参与
顶 发自小木虫Android客户端
54如来哥哥3楼
2016-03-30 21:37   回复  
836277455(金币+2): 谢谢参与
愁 发自小木虫Android客户端
xtuchen6楼
2016-03-30 22:19   回复  
836277455(金币+2): 谢谢参与
xtuchen7楼
2016-03-30 22:19   回复  
836277455(金币+2): 谢谢参与
xtuchen8楼
2016-03-30 22:19   回复  
836277455(金币+2): 谢谢参与
chentao9楼
2016-03-30 22:20   回复  
836277455(金币+2): 谢谢参与
chentao10楼
2016-03-30 22:20   回复  
836277455(金币+2): 谢谢参与
chentao11楼
2016-03-30 22:20   回复  
836277455(金币+2): 谢谢参与
相关版块跳转 我要订阅楼主 836277455 的主题更新
211/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +3 kongweilin 2026-03-26 3/150 2026-03-26 00:53 by 15723253818
[考研] 292求调剂 +7 鹅鹅鹅额额额额� 2026-03-25 8/400 2026-03-26 00:22 by Dyhoer
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +14 tcxiaoxx 2026-03-20 16/800 2026-03-25 23:14 by peike
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +9 RichLi_ 2026-03-25 9/450 2026-03-25 22:21 by 418490947
[考研] 299求调剂 +7 某某某某位 2026-03-21 8/400 2026-03-25 20:34 by 热情沙漠
[考研] 278求调剂 +4 我可以上岸的对� 2026-03-19 4/200 2026-03-25 11:01 by userper
[考研] 299求调剂 +7 shxchem 2026-03-20 9/450 2026-03-25 10:41 by lbsjt
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 材料专硕找调剂 +5 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:07 by 了了了了。。
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +5 谷雨上岸 2026-03-23 6/300 2026-03-24 16:32 by laoshidan
[基金申请] 请教下大家 2026年国家基金申请是双盲审吗？ +3 lishucheng1 2026-03-22 5/250 2026-03-24 08:22 by gltch
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 一志愿华中科技大学071000，求调剂 +4 沿岸有贝壳6 2026-03-21 4/200 2026-03-22 07:21 by ilovexiaobin
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭